【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人胚肺成纖維細胞；HFL1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞為穩(wěn)定二倍體細胞。
培養(yǎng)條件 F12K 10%FBS
傳代方法 1:4-1:6，每周換液2-3次
傳代情況 P16
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
支原體檢測
STR Amelogenin:X；CSF1PO:10；D13S317:8；D16S539:9,11；D18S51:15；D21S11:31.2,32.2；D3S1358:15,17；D5S818:11,12；D7S820:11；D8S1179:12,14；FGA:21,24；PentaD:9,14；PentaE:21；TH01:6,9；TPOX:8；vWA:16
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
L-LDH(Human L-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 人L-乳酸脫氫酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
ASM(Human acid sphingomyelinase) ELISA Kit 人酸神經鞘磷脂酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
ALOX-5(Human arachidonate 5-lipoxygenase) ELISA Kit 人花生四烯酸5脂加氧酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
5-LO/LOX(Human 5-lipoxygenase) ELISA Kit 人5脂加氧酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
AC-1(Human adenylyl cyclase 1) ELISA Kit 人腺苷酸環(huán)化酶1 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
sAC(Human Soluble Adenylate Cyclase) ELISA Kit 人可溶腺苷酸環(huán)化酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
ODC(Human Ornithine decarboxylase) ELISA Kit 人*脫羧酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
PTK/CD115(Human protein tyrosine kinase) ELISA Kit 人蛋白*激酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
PTP/PTPase/CD148(Human protein tyrosine phosphatase) ELISA Kit 人蛋白*磷酸酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
TACE(Human TNF Alpha converting enzyme) ELISA Kit 人腫瘤壞死因子α轉化酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
PMN Elastase(Human Polymorphonuclear Elastase) ELISA Kit 人多形核白細胞彈蛋白酶 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
uPA/PLAU(Human urokinase-type plasminogen activator) ELISA Kit 人*型纖溶酶原激活物 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
KLK 8(Human urokinase-type plasminogen activator) ELISA Kit 人*8 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48TGPR110 英文名稱： G蛋白偶聯受體110抗體 ?0.2ml
GPR12 英文名稱： G蛋白偶聯受體12抗體 ?0.2ml
GPR124 英文名稱： 腫瘤血管內皮標志物/G蛋白偶聯受體124抗體 ?0.2ml
GPR58 英文名稱： G蛋白偶聯受體58抗體 ?0.2ml
GPR128 英文名稱： G蛋白偶聯受體128抗體 ?0.2ml
GPR128 英文名稱： G蛋白偶聯受體128抗體 ?0.2ml
GPR146 英文名稱： G蛋白偶聯受體146抗體 ?0.2ml
GPR146 英文名稱： G蛋白偶聯受體146抗體 ?0.2ml
GPR17 英文名稱： G蛋白偶聯受體17抗體 ?0.2ml
GPR19 英文名稱： G蛋白偶聯受體19抗體 ?0.2ml
GPR20 英文名稱： G蛋白偶聯受體20抗體 ?0.2ml
GPR21 英文名稱： G蛋白偶聯受體21抗體 ?0.2ml
GPR22 英文名稱： G蛋白偶聯受體22抗體 ?0.2ml
GPR25 英文名稱： G蛋白偶聯受體25抗體 ?0.2ml
GPR26 英文名稱： G蛋白偶聯受體26抗體 ?0.2ml
