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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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產(chǎn)品型號
品 牌
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所 在 地上海市
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更新時間:2017-01-19 17:05:14瀏覽次數(shù):187次
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人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC培養(yǎng),細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基,這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。
【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞可用于血管內(nèi)皮修復(fù)損傷的研究。
培養(yǎng)條件 Medium 200 + LSGS
傳代方法
傳代情況 P3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
產(chǎn)品名稱 | 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC培養(yǎng) |
貨期 | 3-5天 |
發(fā)貨地 | 上海 |
復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
PDH E1(Human pyruvate dehydrogenase-E1) ELISA Kit 人丙酮酸脫氫酶E1 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
GSK(Human glycogen synthase kinase) ELISA Kit 人糖原合成酶激酶 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
Casp-9(Human Caspase-9) ELISA Kit 人胱天蛋白酶9 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
Casp-3(Human Caspase 3) ELISA Kit 人胱天蛋白酶3 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
NE(Human neutrophil elastase) ELISA Kit 人中粒細(xì)胞彈蛋白酶 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
CA-2(Human carbonic anhydrase 2) ELISA Kit 人碳酸酐酶2 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
ADAM8(Human A Disintegrin And Metalloprotease 8) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶8 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
MPO(Human myeloperoxidase) ELISA Kit 人髓過氧化物酶 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
Gzms-B(Human granzymes B) ELISA Kit 人顆粒酶B Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
Gzms-A(Human granzymes A) ELISA Kit 人顆粒酶A Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
CIAP(Human Calf intestinal alkaline phosphatase) ELISA Kit 人牛小腸堿磷酸酶 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48TGZMA/Granzyme A 英文名稱: 顆粒酶A抗體 ?0.1ml
Granzyme D/B/E/N/G/F/H 英文名稱: 顆粒酶D/B/E/N/G/F/H抗體 ?0.1ml
G-CSFR/CD114/GCSF Receptor 英文名稱: 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3受體抗體 ?0.1ml
GPA/GYPA/CD235a 英文名稱: 血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體 ?0.1ml
GPATCH3 英文名稱: G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 ?0.2ml
GPR63 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體GPR63蛋白抗體 ?0.2ml
phospho-GATA1(Ser161) 英文名稱: 磷酸化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體 ?0.1ml
GPR109A 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體 ?0.1ml
GPR15 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體15抗體 ?0.1ml
IL3RB 英文名稱: 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體β抗體 ?0.1ml
GAS8 英文名稱: 生長停滯特異蛋白8抗體 ?0.2ml
GPR135 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體GPR135蛋白抗體 ?0.2ml
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