【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人胚肺二倍體細胞；KMB-17使用說明書
形態特性 成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 來自于4周齡女孩胚胎，1975年中國醫學*昆明醫學生物學研究所建立；可作為轉染宿主，用于肺損傷或分化的研究。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%
傳代方法 1：2-1：4
傳代情況 P10
凍存條件 基礎培養液+20%牛血清+10%DMSO
支原體檢測 培養法（-）
STR Amelogenin:X； D7S820:9,11；CSF1PO:12；D13S317:9,12；D16S539:11,13；D18S51:14,17；D21S11:29,30；D3S1358:16；D5S818:13；D8S1179:11,13；FGA:20,27；PentaD:9,13；PentaE:12,15；TH01:7；TPOX:10,11；vWA:14,18
同工酶 人B,NP,G8PG,MD,AST
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
eNOS(Human Endothelial nitric oxide synthase) ELISA Kit 人內皮型一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 規格： 48T
HO-1(Human heme oxygenase 1) ELISA Kit 人血紅素氧合酶1 Multi-class antibodies 規格： 48T
iNOS(Human inducible nitric oxide synthase) ELISA KIT 人誘導型一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 規格： 48T
PL-A2(Human Phospholipidase A2) ELISA Kit 人磷脂酶A2 Multi-class antibodies 規格： 48T
NOS(Human nitric oxide synthase) ELISA Kit 人一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 規格： 48T
TE(Human omerase) ELISA Kit 人端粒酶 Multi-class antibodies 規格： 48T
MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit 人基質金屬蛋白酶5 Multi-class antibodies 規格： 48T
MMP-4(Human matrix metalloproteinase 4) ELISA Kit 人基質金屬蛋白酶4 Multi-class antibodies 規格： 48T
MMP-9/Gelatinase B(Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B) ELISA Kit 人基質金屬蛋白酶9/明膠酶B Multi-class antibodies 規格： 48T
NSE(Human Neuron-specific enolase) ELISA Kit 人神經特異烯醇化酶 Multi-class antibodies 規格： 48T
CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme) ELISA Kit 人肌酸激酶同工酶MB Multi-class antibodies 規格： 48TGPR124 英文名稱： G蛋白偶聯受體124抗體（腫瘤血管內皮標記物） ?0.1ml
Galectin 1 英文名稱： 半乳糖凝集素1抗體 ?0.1ml
GANAB 英文名稱： α葡萄糖苷酶2抗體 ?0.1ml
Galectin 7 英文名稱： 半乳糖凝集素7抗體 ?0.2ml
GCDFP15 英文名稱： 特異囊腫病液體蛋白15抗體 ?0.2ml
GCET1 英文名稱： B淋巴細胞生發中心相關蛋白抗體 ?0.2ml
GASC1 英文名稱： 鱗狀細胞癌增強蛋白1抗體 ?0.1ml
G alpha gust 英文名稱： Gα gust抗體 ?0.2ml
GLS1 英文名稱： *酶抗體 ?0.2ml
GCMA 英文名稱： 絨毛膜特異轉錄因子GCMa抗體 ?0.1ml
GBP5 英文名稱： G蛋白結合蛋白5抗體 ?0.2ml
Cancer/testis antigen family 4 member 7 英文名稱： 腫瘤/抗原家族4亞型7抗體 ?0.2ml
GFR alpha 3 英文名稱： GDNF家族受體α3抗體 GFR α3 ?0.2ml
