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人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92 NK92培養(yǎng)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92 [NK92]培養(yǎng)，細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱(chēng)	人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92 [NK92]培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱(chēng) 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92 [NK92]培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞
生長(zhǎng)特性懸浮生長(zhǎng)
特征特性   NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來(lái)的一株白細(xì)胞介素-2依賴(lài)型NK細(xì)胞株。這株細(xì)胞對(duì)很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562和Daudi細(xì)胞。 NK-92細(xì)胞(經(jīng)過(guò)照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。 NK-92細(xì)胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標(biāo)記陽(yáng)性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, C
培養(yǎng)條件   α－MEM：Alpha Minimum Essential Medium (with Nucleosides)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法   1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿(mǎn)。
傳代情況 PN5
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)

人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92 [NK92]培養(yǎng)復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92 [NK92]培養(yǎng)操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
IMA(Human Ischemia Modified Albumin) ELISA Kit 人缺血修飾白蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
8-epi-PGF2 Alpha(Human 8-epi-prostaglandin F2alpha0 ELISA Kit 人8-異構(gòu)前列腺素F2α   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
sVE-Cadherin (Human Vascular Endothelial-Cadherin Complex) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Alpha-SMA(Human Alpha-Smooth muscle actin) ELISA Kit 人α平滑肌肌動(dòng)蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Alpha-SCA(Human Alpha-sarcomeric actin) ELISA Kit 人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
SMM(Human smooth muscle Myosin) ELISA Kit 人平滑肌肌球蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
c(Human cardiac isoform of Tropnin T) ELISA Kit 人心肌特異肌鈣蛋白T   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MHC(Human myosin heavy chain) ELISA Kit 人肌球蛋白重鏈   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
HSP-27(Human heat shock protein 27) ELISA Kit 人熱休克蛋白27   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ANG(Human angiostatin) ELISA Kit 人血管抑素/血管穩(wěn)定蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
h-FABP(Human heart fatty acid binding protein) ELISA Kit 人心型脂肪酸結(jié)合蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48TGRID2IP   英文名稱(chēng)：   *受體δ2/GluR-δ2抗體   ?0.2ml
Glycophorin A   英文名稱(chēng)：   血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體   ?0.1ml
GAD67   英文名稱(chēng)：   *脫羧酶67抗體   ?0.1ml
GADD45   英文名稱(chēng)：   生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因45抗體   ?0.1ml
GIP   英文名稱(chēng)：   胃泌素抑制肽抗體   ?0.1ml
GLUT4   英文名稱(chēng)：   葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體   ?0.1ml
glypican 3   英文名稱(chēng)：   磷脂酰基醇蛋白聚糖-3抗體   ?0.1ml
Glucocorticoid receptor(GR)    英文名稱(chēng)：   糖皮質(zhì)激素受體抗體   ?0.1ml
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92 [NK92]培養(yǎng)GLP-1 (7-36)   英文名稱(chēng)：   胰高血糖素樣肽-1抗體   ?0.1ml
GLUT3   英文名稱(chēng)：   葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體   ?0.1ml
Gelsolin   英文名稱(chēng)：   凝溶膠蛋白抗體   ?0.1ml
GHRH   英文名稱(chēng)：   生長(zhǎng)激素釋放激素抗體   ?0.1ml
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