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人肝細(xì)胞；HL-7702L-02使用說(shuō)明書(shū)

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人肝細(xì)胞；HL-7702[L-02]使用說(shuō)明書(shū)，細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	人肝細(xì)胞；HL-7702[L-02]使用說(shuō)明書(shū)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 人肝細(xì)胞；HL-7702[L-02]使用說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性   上皮樣
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清，20%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN5
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

人肝細(xì)胞；HL-7702[L-02]使用說(shuō)明書(shū)復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
人肝細(xì)胞；HL-7702[L-02]使用說(shuō)明書(shū)操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
MLKL(Human mixed lineage kinase domain-like) ELISA Kit 人混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PPARGC1(Human peroxisome proliferative activated receptor gama coactivator 1 alpha) ELISA Kit 人過(guò)氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
human similar to cDNA sequence BC027382 ELISA Kit 人類似cDNA順序BC027382   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
human similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA kit 人類似RIKEN cDNA 4931408D14 基因   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
RCOR3(Human REST corepressor 3) ELISA Kit 人REST協(xié)阻抑因子3   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
COLEC11(Human collectin sub-family member 11) ELISA Kit 人集蛋白亞家族成員11   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Alpha1 Beta-GP(Human Alpha1 Beta glycoprotein) ELISA Kit 人α1β糖蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
sTREM-1(Human soluble Triggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1) ELISA Kit 人可溶髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MSTN(Human Myostatin) ELISA Kit 人肌抑素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor) ELISA Kit 人黑素瘤衍生*拉鏈額外核因子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
UGT2B4(Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polypeptide B4) ELISA Kit 人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PPP1R1A(Human protein phosphatase 1 regulatory subunit A) ELISA Kit 人蛋白磷酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48TGPR180   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體GPR180蛋白抗體   ?0.2ml
GPS2   英文名稱：   G蛋白通路抑制物蛋白2抗體   ?0.2ml
GPR177   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體GPR177蛋白抗體   ?0.2ml
GPR89A   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體GPR89A蛋白抗體   ?0.2ml
GPRASP2   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體GPRSP2蛋白抗體   ?0.2ml
GPRC5C   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體GPRC5C蛋白抗體   ?0.2ml
GNA14   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白α14/Gα 14 抗體   ?0.2ml
GNB1L   英文名稱：   G蛋白β樣蛋白抗體   ?0.2ml
人肝細(xì)胞；HL-7702[L-02]使用說(shuō)明書(shū)GNB5   英文名稱：   G蛋白β5/Gβ 5 抗體   ?0.2ml
GNG13   英文名稱：   G蛋白γ13/Gγ13 抗體   ?0.1ml
GNG5   英文名稱：   G蛋白γ5/Gγ5 抗體   ?0.2ml
GNGT1   英文名稱：   G蛋白γ 1/Gγ 1 抗體   ?0.2ml
GNL2   英文名稱：   *核苷酸結(jié)合蛋白2抗體   ?0.2ml