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人羊膜細胞;HA培養

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-19 17:25:27瀏覽次數:217次

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產品簡介

人羊膜細胞;HA培養,細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱人羊膜細胞;HA培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  人羊膜細胞;HA培養
形態特性  
生長特性  貼壁生長
特征特性    
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清,10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況  PN
凍存條件   *培養基+8%DMSO
支原體檢測  陰性
STR   Amelogenin:X;CSF1PO:9,10;D13S317:12,13.3;D16S539:9;D18S51:16;D19S433:13,14;D21S11:27;D2S1338:17;D3S1358:15,18;D5S818:11,12;D7S820:12;D8S1179:12,13;FGA:21;TH01:7;TPOX:8,12;vWA:18
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
CpG-ODN(Human CpG oligodeoxynucleotide) ELISA Kit  人未甲基化寡聚脫氧核苷酸    Multi-class antibodies    規格:     48T
IRAP(Human ICE protease-activating factor) ELISA Kit  人ICE蛋白酶激活因子    Multi-class antibodies    規格:     48T
NON(Human nonmethylated oligonucleotide0 ELISA Kit  人非甲基化寡核苷酸    Multi-class antibodies    規格:     48T
Human Protein Z ELISA Kit  人蛋白Z    Multi-class antibodies    規格:     48T
Human Protein S ELISA Kit  人蛋白S    Multi-class antibodies    規格:     48T
sEPCR(Human soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit  人可溶血管內皮細胞蛋白C受體    Multi-class antibodies    規格:     48T
C/EBP Epsilon (Human CCAAT/enhancer binding protein epsilon) ELISA Kit  人CCAAT增強子結合蛋白ε    Multi-class antibodies    規格:     48T
C/EBP Delta(Human CCAAT/enhancer binding protein deta) ELISA Kit  人CCAAT增強子結合蛋白δ    Multi-class antibodies    規格:     48T
C/EBP Alpha(Human CCAAT/enhancer binding protein alpha) ELISA Kit  人CCAAT增強子結合蛋白α    Multi-class antibodies    規格:     48T
2,3-DPG(Human 2,3-Disphosphoglycerate,2) ELISA Kit  人2,3-二磷酸甘油酸    Multi-class antibodies    規格:     48T
LUM(Human lumican) ELISA Kit  人基膜聚糖/內腔蛋白    Multi-class antibodies    規格:     48T
NHE3(Human Na+/H+ exchanger 3) ELISA Kit  人Na+/H+交換體3    Multi-class antibodies    規格:     48T
OFQ/N(Human orphanin FQ/nociceptin) ELISA Kit  人孤腓肽    Multi-class antibodies    規格:     48TGOLPH4    英文名稱:    高爾基體膜蛋白抗體    ?0.2ml
GORASP2    英文名稱:    高爾基體磷蛋白6抗體    ?0.2ml
GOSR1    英文名稱:    高爾基SNAP受體復合物1抗體    ?0.2ml
GOT1L1    英文名稱:    *草酰乙酸轉氨酶1樣蛋白1抗體    ?0.2ml
GPR52    英文名稱:    G蛋白偶聯受體52抗體    ?0.2ml
GP210    英文名稱:    核膜糖蛋白210抗體    ?0.2ml
GADD153    英文名稱:    GADD153抗體    ?0.1ml
GPR57    英文名稱:    G蛋白偶聯受體57抗體    ?0.2ml
FRAT2    英文名稱:    GSK-3結合蛋白FRAT2抗體    ?0.2ml
phospho-gamma Adducin (Ser693)    英文名稱:    磷酸化內收蛋白gamma抗體    ?0.1ml
GAPT    英文名稱:    生長因子受體結合適應蛋白抗體    ?0.2ml

 

 


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