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人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞；HEH2培養(yǎng)

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更新時間：2017-01-20 10:52:12瀏覽次數(shù)：356次

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產(chǎn)品簡介

人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞；HEH2培養(yǎng)一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱	人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞；HEH2培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞；HEH2培養(yǎng)
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   該細(xì)胞系來源于一男性胎兒的心臟組織，2009年由中科院昆明細(xì)胞庫建立。
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%FBS
傳代方法   1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測熒光法（-）
STR   -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
BrdU ELISA Kit 大鼠溴脫氧核苷*   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
TGF Beta2 ELISA Kit 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CYP2E1 ISA Kit 大鼠細(xì)胞色素P4502E1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Alpha1-MG ELISA Kit 大鼠α1微球蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MCP-4/CCL13 ELISA Kit 大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PPAR- Alpha ELISA Kit 大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CAM ELISA Kit 大鼠鈣調(diào)素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Apo-E ELISA Kit 大鼠載脂蛋白E   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
omentin ELISA Kit 大鼠網(wǎng)膜素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
OFQ/N ELISA Kit 大鼠孤腓肽   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48THIV1 gp120   英文名稱：   艾滋病病毒抗體   ?0.1ml
HIV gp160   英文名稱：   艾滋病病毒-1包膜糖蛋白抗體   ?0.1ml
HIV gp41   英文名稱：   艾滋病病毒抗體   ?0.2ml
HIV1 gp160   英文名稱：   艾滋病病毒-1包膜糖蛋白抗體   ?0.1ml
Phospho-Histone H3 (Ser10)   英文名稱：   磷酸化組蛋白H3抗體   ?0.1ml
HADHSC(mouse, rat)   英文名稱：   短鏈L-3羥烷基*脫氫酶抗體（小鼠，大鼠）   ?0.2ml
HOXD10   英文名稱：   同源盒蛋白HOXD10抗體   ?0.2ml
HHIPL1    英文名稱：   HHIP樣蛋白1抗體   ?0.2ml
HOXA10   英文名稱：   HOXA10抗體   ?0.1ml
hCG receptor    英文名稱：   促黃體生成素受體抗體   ?0.2ml
HER2 receptor(NT)   英文名稱：   HER2受體抗體(N端)   ?0.1ml
HER2 receptor(NT)   英文名稱：   HER2受體抗體   ?0.1ml