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人胚腎上皮細胞;GC-293T培養

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更新時間:2017-01-20 11:01:05瀏覽次數:749次

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產品簡介

人胚腎上皮細胞;GC-293T培養一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

細胞名稱  人胚腎上皮細胞;GC-293T培養
形態特性   上皮樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。 
培養條件    10%FBS
傳代方法   無
傳代情況  1:3傳代,3-4天傳1次
凍存條件   C5
支原體檢測  基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
STR   陰性
同工酶  
染色體   未做

產品名稱人胚腎上皮細胞;GC-293T培養
貨期3-5天
發貨地上海

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
TAFI ELISA Kit  大鼠纖溶抑制因子/*激活的纖溶抑制物    Multi-class antibodies    規格:     48T
GP- II b III a/CD41+CD61 ELISA Kit  大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa    Multi-class antibodies    規格:     48T
TSP-1 ELISA Kit  大鼠血小板反應蛋白/*敏感蛋白1    Multi-class antibodies    規格:     48T
ON ELISA Kit  大鼠骨粘連蛋白    Multi-class antibodies    規格:     48T
FFA ELISA Kit  大鼠游離脂肪酸    Multi-class antibodies    規格:     48T
FA ELISA Kit  大鼠*    Multi-class antibodies    規格:     48T
histon-H2b ELISA Kit  大鼠組蛋白H2b    Multi-class antibodies    規格:     48T
NT-proBNP ELISA KIT  大鼠N端前腦鈉素    Multi-class antibodies    規格:     48T
GR ELISA Kit  大鼠糖皮質類固醇受體    Multi-class antibodies    規格:     48T
LHRH ELISA Kit  大鼠黃體生成素釋放激素    Multi-class antibodies    規格:     48T
8-iso-PG ELISA Kit  大鼠8異前列腺素    Multi-class antibodies    規格:     48T
IFI16/p16 ELISA Kit  大鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16    Multi-class antibodies    規格:     48T
SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit   大鼠基質細胞衍生因子1a    Multi-class antibodies    規格:     48T
GMP-140 ELISA Kit   大鼠血漿α顆粒膜蛋白    Multi-class antibodies    規格:     48T
MPO ELISA Kit  大鼠髓過氧化物酶    Multi-class antibodies    規格:     48Tphospho-HMGCR(Ser872)    英文名稱:    磷酸化三羥基*基*還原酶抗體    ?0.1ml
HSD3a    英文名稱:    羥基類固醇脫氫酶3α抗體    ?0.2ml
HLX1    英文名稱:    同源異型盒基因HLX1蛋白抗體    ?0.2ml
HMGCS1    英文名稱:    三羥基*基*合成酶1    ?0.2ml
HSF1    英文名稱:    熱休克因子1抗體    ?0.1ml
phospho-HSF1(Ser326)    英文名稱:    磷酸化熱休克因子1抗體    ?0.1ml
Hsc70    英文名稱:    熱休克蛋白71抗體    ?0.1ml
hHBrk1    英文名稱:    微絲相關蛋白hHBrk1抗體    ?0.1ml
HPCL2    英文名稱:    植烷酰*羥化酶2抗體    ?0.2ml
H9N1 Neuraminidase    英文名稱:    A型流感病毒H9N1神經氨酸酶型抗體    ?0.2ml
H9N1 Hemagglutinin    英文名稱:    A型流感病毒H9N1血凝素型抗體    ?1ml
HPV33 E7    英文名稱:    人類狀瘤病毒33抗體    ?0.2ml
H1N1 Matrix Protein 1    英文名稱:    A型病毒H1N1蛋白抗體    ?0.1ml

 

 

 


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