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SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19培養(yǎng)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19培養(yǎng)
形態(tài)特性
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性   在0.6mg/ml*G418存在下，用溫度敏感的表達(dá)載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染胎兒四肢組織，建立了此細(xì)胞系。在許可溫度33.5oC下細(xì)胞分裂很快，而在限制溫度39.5oC下細(xì)胞極少分裂或不分裂。這些細(xì)胞具有分化為表達(dá)造骨細(xì)胞表型的成熟造骨細(xì)胞的能力。這些細(xì)胞提供了一個(gè)同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人造骨細(xì)胞的分化，造骨細(xì)胞生理和激素，生長(zhǎng)因子，和對(duì)造骨細(xì)胞的功能及分化有影響的細(xì)胞因子。
培養(yǎng)條件   DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.3mg/ml G418
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN5
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
HDLBP   英文名稱：   高密度脂蛋白結(jié)合蛋白抗體   ?0.2ml
HNF3-alpha   英文名稱：   轉(zhuǎn)錄因子HNF-3α抗體   ?0.1ml
HSPB7   英文名稱：   熱休克蛋白β7抗體   ?0.2ml
HECTD2   英文名稱：   E3連接酶抑制素受體2抗體   ?0.2ml
HAPLN3   英文名稱：   透明質(zhì)酸及粘蛋白3抗體   ?0.2ml
C22orf28   英文名稱：   22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框28抗體   ?0.1ml
C14orf94   英文名稱：   14號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框94抗體   ?0.2ml
HDDC3   英文名稱：   四磷酸鳥(niǎo)苷水解酶抗體   ?0.2ml
HIV2 gp36   英文名稱：   人類免疫缺陷病毒2型/2型艾滋病病毒gp36抗體   ?0.1ml
HUNK   英文名稱：   激素上調(diào)神經(jīng)腫瘤相關(guān)激酶抗體   ?0.2ml
HEXA   英文名稱：   β氨基己糖苷酶A抗體   ?0.2ml
HECW1   英文名稱：   肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白HECW1抗體   ?0.2mlPAI-1 ELISA Kit 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PAI ELISA Kit 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
FDP ELISA Kit 大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
TM ELISA Kit 大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PDGF ELISA Kit 大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
OxLDL ELISA Kit 大鼠氧化低密度脂蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PAF ELISA Kit 大鼠血小板活化因子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
P III NT ELISA Kit 大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Col III ELISA Kit 大鼠Ⅲ型膠原   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CRP ELISA Kit 大鼠C反應(yīng)蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
TPA ELISA Kit 大鼠組織多肽抗原   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
t-PA ELISA Kit 大鼠組織型纖溶酶原激活劑   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
TF ELISA Kit 大鼠組織因子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T