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EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KM933培養(yǎng)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KM933培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱(chēng)	EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KM933培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱(chēng) EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KM933培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性懸浮生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞來(lái)源于一正常女性的外周血。1993年由*昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法   1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR   -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀(guān)察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀(guān)察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀(guān)察。
Integrin beta 7   英文名稱(chēng)：   整合素β7抗體   ?0.1ml
IQGAP1   英文名稱(chēng)：   支架蛋白抗體   ?0.2ml
IGC   英文名稱(chēng)：   非洲爪蟾IGC抗體   ?1ml
IFITM1   英文名稱(chēng)：   干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體   ?0.1ml
IFN-β   英文名稱(chēng)：   干擾素β抗體   ?0.1ml
IFN gamma(F2E4)   英文名稱(chēng)：   γ-干擾素/γ-IFN單克隆抗體   ?0.1ml
IFN gamma   英文名稱(chēng)：   干擾素-γ/IFN-γ抗體   ?0.1ml
IFN gamma   英文名稱(chēng)：   干擾素-γ/IFN-γ抗體   ?0.1ml
IGF1R   英文名稱(chēng)：   胰島素樣生長(zhǎng)因子I受體抗體   ?0.1ml
IGF1R   英文名稱(chēng)：   胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體抗體   ?0.1ml
IGFBP2   英文名稱(chēng)：   胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2抗體   ?0.1ml
IGFBP5   英文名稱(chēng)：   胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5抗體   ?0.1mlHABP(Mouse Hya]uronate binding protein) ELISA Kit 小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CyPA(Mouse cyclophilin A) ELISA Kit 小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
BMP-6(Mouse Bone morphogenetic protein 6) ELISA Kit 小鼠骨形成蛋白6   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Mouse lymphocyte factor ELISA Kit 小鼠淋巴細(xì)胞因子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ADH/VP/AVP(Mouse antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin) ELISA Kit 小鼠抗利尿激素/血管加壓素/*加壓素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
AcSDKP(Mouse N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro) ELISA Kit 小鼠N-乙酰基-絲氨酰-天門(mén)冬酰-賴(lài)氨酰-*   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PA-IgG/M/A(Mouse plaet antibodies IgG/M/A) ELISA Kit 小鼠抗血小板抗體IgG/M/A   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
FN(Mouse Fibronectin) ELISA Kit 小鼠纖連蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Flt3(Mouse FMS-like tyrosine kinase 3) ELISA Kit 小鼠FMS樣*激酶3   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
IGFBP-1(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 1) ELISA Kit 小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
IGFBP-2(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 2) ELISA Kit 小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
IL-16(Mouse Interleukin 16) ELISA Kit 小鼠白介素16   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T