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EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0922使用說明書

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更新時間：2017-01-20 12:41:40瀏覽次數(shù)：200次

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產(chǎn)品簡介

EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0922使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

產(chǎn)品名稱	EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0922使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0922使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性懸浮生長
特征特性   該細胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)   15%NBS
傳代方法   1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測熒光法（-）
STR   -
同工酶
染色體
使用權限 A類

復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
IL-6   英文名稱：   白介素6   ?0.1ml
IL-6   英文名稱：   白介素6抗體   ?0.1ml
IL-6   英文名稱：   白介素6抗體   ?0.1ml
Inhibin Alpha   英文名稱：   抑制素A/Inhibin α抗體   ?0.1ml
ILTV glycoprotein E   英文名稱：   雞傳染喉氣管炎病毒糖蛋白E抗體   ?0.2ml
intestinal FABP   英文名稱：   小腸型脂肪酸結合蛋白抗體   ?0.1ml
IL-7Ra   英文名稱：   白細胞介素-7受體a抗體   ?0.1ml
Integrin alpha 3   英文名稱：   整合素α3抗體   ?0.1ml
Integrin beta 5   英文名稱：   整合素β5抗體   ?0.1ml
Integrin alpha 1   英文名稱：   整合素α1抗體   ?0.1ml
IL2 Receptor beta   英文名稱：   白介素2受體β鏈抗體 IL-2Rβ   ?0.1ml
Interferon alpha 2b   英文名稱：   干擾素α2b抗體   ?0.1ml
ICOS ligand   英文名稱：   誘導協(xié)同刺激分子配體CD275抗體   ?0.1ml-NT(Mouse 5-Nucleotidase) ELISA Kit 小鼠5核苷酸酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CD19(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD19分子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CD3(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD3分子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CD4(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD4分子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CD8(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD8分子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CD25(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD25分子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CD20(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD20分子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CD14(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD14分子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
NGF(Mouse Nerve growth factor) ELISA kit 小鼠神經(jīng)生長因子   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
NT-3(Mouse Neurotrophin 3) ELISA kit 小鼠神經(jīng)生長因子3   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T