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EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0909培養(yǎng)

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更新時間：2017-01-20 12:47:34瀏覽次數(shù)：312次

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產(chǎn)品簡介

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0909培養(yǎng)細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

產(chǎn)品名稱	EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0909培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0909培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性懸浮生長
特征特性   該細胞系來源于一重度少精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法   1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測熒光法（-）
STR   -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
phospho-ICAM1(Tyr512)   英文名稱：   磷酸化細胞間粘附分子1抗體   ?0.1ml
phospho-ITGB3(Tyr785)   英文名稱：   磷酸化整合素β3抗體   ?0.1ml
phospho-IGF1R (Tyr980)   英文名稱：   磷酸化胰島素樣生長因子1受體抗體   ?0.1ml
phospho-IGF1R (Tyr1280)   英文名稱：   磷酸化胰島素樣生長因子1受體抗體   ?0.1ml
phospho-IGF1R (Tyr1165 + Tyr1166)   英文名稱：   磷酸化胰島素樣生長因子1受體抗體   ?0.1ml
phospho-ITGB3(Tyr773)   英文名稱：   磷酸化整合素β3抗體   ?0.1ml
IGIP   英文名稱：   免疫球蛋白A誘導(dǎo)同源蛋白抗體   ?0.2ml
IL-2   英文名稱：   白介素2抗體   ?0.2ml
IL-2   英文名稱：   白介素2抗體   ?0.2ml
ID4   英文名稱：   DNA結(jié)合抑制因子4抗體   ?0.1ml
IGF2R   英文名稱：   胰島素樣生長因子2受體抗體   ?0.1ml
IKZF3   英文名稱：   鋅指蛋白Aiolos抗體   ?0.2ml
SOX13   英文名稱：   胰島細胞抗原12/核轉(zhuǎn)錄因子SOX13抗體   ?0.2ml
INSC   英文名稱：   有絲分裂相關(guān)蛋白INSC抗體   ?0.2mlDPD(Mouse deoxypyridinoline) ELISA Kit 小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PY(Mouse pyridinium crosslink/PyriLinks) ELISA Kit 小鼠吡啶交聯(lián)物   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
OPN(Mouse Osteopontin) ELISA Kit 小鼠骨橋素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ACTH(mouse adrencocorticotropic hormone) ELISA Kit 小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ALP-B(Mouse Bone-specific Alkphase B) ELISA Kit 小鼠骨特異堿磷酸酶B   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
TFR/CD71(Mouse transferrin receptor) ELISA Kit 小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Cys-C(Mouse Cystatin C) ELISA Kit 小鼠半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
F VIII Ag(Mouse Factor VIII -related Antigen) ELISA Kit 小鼠第八因子相關(guān)抗原   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
M2-PK(Mouse Pyruvate Kinase) ELISA Kit 小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PRL(mouse prolactin) ELISA Kit 小鼠催乳素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Resistin(Mouse Resistin) ELISA Kit 小鼠抵抗素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
AChRab(Mouse acetylcholine receptor antibody) ELISA Kit 小鼠乙酰*受體抗體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
OT/BGP(Mouse Osteocalcin/Bone gla protein) ELISA Kit 小鼠骨鈣素/骨*蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T