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人急性淋巴母細胞性白血病細胞;MOLT-4使用說明書

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更新時間:2017-01-20 13:18:52瀏覽次數:337次

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產品簡介

人急性淋巴母細胞性白血病細胞;MOLT-4使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱  人急性淋巴母細胞性白血病細胞;MOLT-4使用說明書
形態特性   淋巴母細胞樣;圓形
生長特性  懸浮生長
特征特性   MOLT-4與MOLT-3來源于一名19歲的男性急性淋巴細胞性白血病的復發患者,該患者前期接受過多種藥物聯合*。MOLT-4細胞系為T淋巴細胞起源,p53基因的第248位密碼子有一個G→A突變,不表達p53,不表達免疫球蛋白或EB病毒;可產生高水平的末端脫氧核糖轉移酶;表達CD1 (49%), CD2 (35%), CD3 A (26%) B (33%) C (34%), CD4 (55%), CD5 (72%), CD6 (22%), CD7 (77%)。 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   維持細胞濃度在4×105/ml~2×106/ml;根據細胞濃度每2~3天補液1次。
傳代情況  C5
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12,13;D13S317:12,13;D16S539:11,14;D18S51:13,17;D19S433:14,15;D21S11:28,29,30,31;D2S1338:23,24;D3S1358:14,16;D5S818:12;D7S820:8,10,11;D8S1179:9,14;FGA:22,23,25;TH01:6,8;TPOX:8;vWA:17,18
同工酶  
染色體   84~89
使用權限  A類

產品名稱人急性淋巴母細胞性白血病細胞;MOLT-4使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
NES/KLK10    英文名稱:    上皮細胞特異蛋白1抗體    ?0.1ml
phospho-KCNC1(Ser503)    英文名稱:    磷酸化離子通道蛋白Kv3.1抗體    ?0.1ml
KAT4    英文名稱:    細胞周期基因1蛋白抗體    ?0.1ml
KLF5    英文名稱:    驅動蛋白KIF5B抗體    ?0.1ml
KLHL13    英文名稱:    kelch樣蛋白13抗體    ?0.2ml
KCNN3    英文名稱:    鈣激活鉀通道蛋白3抗體    ?0.1ml
KIBRA    英文名稱:    腎臟和腦蛋白抗體    ?0.2ml
KIF2B    英文名稱:    有絲分裂驅動蛋白樣2B抗體    ?0.2ml
KLHL9    英文名稱:    kelch樣蛋白9抗體    ?0.2ml
KIF15    英文名稱:    驅動蛋白家族成員15抗體    ?0.2ml
KNTC1    英文名稱:    著絲點關聯蛋白1抗體    ?0.2ml
KLHDC5    英文名稱:    kelch樣蛋白5抗體    ?0.2mlIL-6 (Rabbit Interleukin 6) ELISA Kit  兔白介素6    Multi-class antibodies    規格:     96T
Alpha2-AP (Rabbit Alpha2-Antiplasmin) ELISA Kit  兔子α2抗纖溶酶    Multi-class antibodies    規格:     96T
SAA (Rabbit Serum amyloid A) ELISA Kit  兔血清淀粉樣蛋白A    Multi-class antibodies    規格:     96T
Hpt/HP (Rabbit Haptoglobin) ELISA Kit  兔結合珠蛋白/觸珠蛋白    Multi-class antibodies    規格:     96T
Plg (Rabbit Plasminogen) ELISA Kit  兔子纖溶酶原    Multi-class antibodies    規格:     96T
BMPs (Rabbit bone morphogenetic proteins) ELISA Kit  兔骨形成蛋白    Multi-class antibodies    規格:     96T
OPG (Rabbit Osteoprotegerin) ELISA Kit  兔骨保護素    Multi-class antibodies    規格:     96T
Amylin (Rabbit Amylin ) ELISA Kit  兔胰淀素    Multi-class antibodies    規格:     96T
cTn- I (Rabbit cardiac troponin I ) ELISA Kit  兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ    Multi-class antibodies    規格:     96T
RANKL (Rabbit receptor activator of nuclear factor kappa B ligand) ELISA Kit  兔核因子κB受體活化因子配基    Multi-class antibodies    規格:     96T

 

 

 


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