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人組織細胞淋巴瘤細胞;U937 U-937使用說明書

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更新時間:2017-01-20 13:33:04瀏覽次數:167次

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產品簡介

人組織細胞淋巴瘤細胞;U937 [U-937]使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

細胞名稱  人組織細胞淋巴瘤細胞;U937 [U-937]使用說明書
形態特性   單核細胞
生長特性  懸浮生長
特征特性   該細胞是由Nilsson K實驗室于1974年從一名37歲的患有惡性組織細胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分離建立的。1979年來的研究顯示該細胞在人混合淋巴細胞培養物上清、佛波酯、Vit D3、γ-IFN、TNF和*的誘導下可以向終末單核細胞分化。該細胞不合成免疫球蛋白,EBV陰性;可產生*、β-2-微球蛋白,受PMA刺激后可產生TNF-α;表達C3R;可作轉染宿主;表達Fas,對TNF和抗Fas的抗體敏感。 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   維持細胞濃度在1×105~2×106/ml;根據細胞濃度3~4換液1次。
傳代情況  C5
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   Amelogenin:X;CSF1PO:12;D13S317:10,12;D16S539:12;D18S51:13,14;D19S433:14,16;D21S11:27,29;D2S1338:17,20;D3S1358:16;D5S818:12;D7S820:9,11;D8S1179:12,13;FGA:22,25;TH01:6,9.3;TPOX:8,11;vWA:14,15;
同工酶  
染色體   54~60
使用權限  A類

產品名稱人組織細胞淋巴瘤細胞;U937 [U-937]使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

人組織細胞淋巴瘤細胞;U937 [U-937]使用說明書復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
人組織細胞淋巴瘤細胞;U937 [U-937]使用說明書操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Laminin 5    英文名稱:    層粘連蛋白5(laminin γ2)抗體    ?0.1ml
Lactoperoxidase    英文名稱:    唾液過氧化物酶LPO抗體    ?0.1ml
lysozyme    英文名稱:    *抗體    ?0.1ml
lysozyme    英文名稱:    *抗體    ?0.1ml
LAD1    英文名稱:    LAD1蛋白抗體    ?0.1ml
LAP2 alpha    英文名稱:    *LAP2抗體    ?0.1ml
LRRC6    英文名稱:    富含*重復蛋白6抗體    ?0.1ml
LRP12    英文名稱:    低密度脂蛋白受體相關蛋白12抗體(抑制腫瘤蛋白7)    ?0.2ml
phospho-LLGL1 + LLGL2(Ser650+Ser654)    英文名稱:    磷酸化相似腫瘤抑制基因HUGL抗體    ?0.1ml
LDL receptor    英文名稱:    低密度脂蛋白受體抗體    ?0.1mlAnti-Phospho-HSP90 alpha (Thr5/7)/FITC  熒光素標記磷酸化熱休克蛋白90α抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti- Beta-arrestin 1/FITC  熒光素標記β-抑制蛋白1抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-Phospho-beta-Arrestin 1(Ser412) /FITC  熒光素標記磷酸化β抑制蛋白1抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti- Beta-arrestin 2/FITC  熒光素標記β-抑制蛋白2抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti- Beta-Amyloid(1-16) /FITC  熒光素標記β淀粉樣肽(1-16)抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Beta-Amyloid(1-28)/FITC  熒光素標記β淀粉樣肽(1-28)抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti- Beta-Amyloid(1-40)/FITC  熒光素標記β淀粉樣肽(1-40)抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Beta-Amyloid 1-40(CT)/FITC  熒光素標記β淀粉樣肽(1-40)C端抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti- Beta-Amyloid 1-40(CT)mouse/FITC  熒光素標記β淀粉樣肽 1-40 C端抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti- Beta-Amyloid 1-42 CT(A Beta1-42)/FITC  熒光素標記β淀粉樣肽1-42 (C端抗體)IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
人組織細胞淋巴瘤細胞;U937 [U-937]使用說明書Anti- Beta-Amyloid(25-35)/FITC  熒光素標記β淀粉樣肽(25-35)抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Beta-Amyloid(31-35)/FITC  熒光素標記β淀粉樣肽(31-35)抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml

 

 

 


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