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上海撫生實業有限公司
人B淋巴細胞瘤細胞;RAMOS培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
產品名稱 | 人B淋巴細胞瘤細胞;RAMOS培養 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 人B淋巴細胞瘤細胞;RAMOS培養
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞來源于一位3歲的白人Burkitt淋巴瘤患者;EBV陰性;表達IL-4受體和低親和性IgE受體(CD23);每個細胞表面大約有1500個IL-4的結合位點;分泌IgM(lamda L);表達膜型和分泌型的免疫球蛋白。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 維持細胞濃度在2×105/ml~1×106/ml;根據細胞濃度每2~3天補液1次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR
同工酶
染色體 38~40
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
LRDD 英文名稱: 富含*重復死亡結構域蛋白抗體 ?0.1ml
LAMR1(CT) 英文名稱: 層粘連蛋白受體1抗體(C端) ?0.2ml
LAMR1 英文名稱: 層粘連蛋白受體1抗體(N端) ?0.1ml
phospho-LEF1(Ser42) 英文名稱: 磷酸化淋巴增強因子-1抗體 ?0.1ml
LAP1 英文名稱: 層粘連相關多肽蛋白1抗體 ?0.2ml
Lubricin 英文名稱: 淺表層粘膜蛋白多糖抗體 ?0.2ml
LHX2 英文名稱: 調控胚胎干細胞分化蛋白Lhx2抗體 ?0.2ml
LRRC2 英文名稱: LRRC2蛋白抗體 ?0.2ml
LRRC4B 英文名稱: 神經突觸蛋白NGL3抗體 ?0.2ml
LCA5L 英文名稱: 致盲基因LCA5樣蛋白抗體 ?0.2mlAnti-ADRB3/ Beta3-AR /RBITC 羅丹明標記腎上腺素能受體β3抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-ADRB3/ Beta3-AR /FITC 熒光素標記腎上腺素能受體β3抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CD8/RBITC 羅丹明標記CD8抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AD7C/FITC 熒光素標記神經絲蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AD7C-NTP/NTP/AF /FITC 熒光素標記神經絲蛋白抗體(人)IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AE3/FITC 熒光素標記陰離子交換蛋白3抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AEV/FITC 熒光素標記禽腦脊髓炎病毒抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AEBP1/FITC 熒光素標記脂肪細胞增強結合蛋白1抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AF6/Afadin/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠絲狀肌動蛋白結合蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-phospho-Afadin(Ser1718) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化絲狀肌動蛋白結合蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AGER/RAGE /FITC 熒光素標記晚期糖基化終末產物特異受體抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
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