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上海撫生實業有限公司
人絨癌細胞;JEG-3使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
產品名稱 | 人絨癌細胞;JEG-3使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 人絨癌細胞;JEG-3使用說明書
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞是由Kohler等從Erwin-Turner腫瘤的 Woods系分離建立的6個克隆中一個,可產生hCG、胎盤催乳素、孕激素;該細胞可將類固醇前體轉化為雌酮和雌二醇。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:4~1:6傳代;每周換液2~3次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12;D13S317:9,11;D16S539:13,14;D18S51:14;D19S433:13,15;D21S11:30;D2S1338:24;D3S1358:15,16;D5S818:10,11;D7S820:10,12;D8S1179:12;FGA:23,24;TH01:9,9.3;TPOX:8;vWA:16;
同工酶
染色體 62~71
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
phospho-MST4 + MST3 + STK25 (Thr178 + Thr190 + Thr174) 英文名稱: 磷酸化*/*蛋白激酶MST4,MST3,STK25抗體 ?0.1ml
MEGF10 英文名稱: 表皮生長因子樣蛋白Megf10抗體 ?0.2ml
MPP4 英文名稱: MPP4蛋白抗體 ?0.2ml
MCM7/CDC47 英文名稱: 微小染色體維持缺陷蛋白7抗體 ?0.1ml
MUL1 英文名稱: E3泛素連接酶MUL1抗體 ?0.2ml
MAGP2 英文名稱: 纖微絲相關糖蛋白2抗體 ?0.1ml
Mast Cell Chymase 英文名稱: 肥大細胞類*1抗體 ?0.1ml
Metronidazole(1C2) 英文名稱: *單克隆抗體 ?0.1ml
MrpL12 英文名稱: 線粒體核糖體蛋白L12抗體 ?0.1ml
MrpL39 英文名稱: 線粒體核糖體蛋白L39 ?0.1ml
Mitochondrial Pyruvate dehydrogenase kinase 1 英文名稱: 丙酮酸脫氫酶激酶1抗體 ?0.1mlAnti-ASPP1/FITC 熒光素標記p53凋亡刺激蛋白1抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-ASPP2/FITC 熒光素標記P53凋亡刺激蛋白2抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AT/AGT /FITC 熒光素標記血管緊張素原抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AT1/FITC 熒光素標記血管緊張素I抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AT1R/FITC 熒光素標記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-AT2R/FITC 熒光素標記血管緊張素Ⅱ-2型受體抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-ATF1/FITC 熒光素標記活化復制因子1抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-ATR/ACTR(phospho Ser428) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化ATR抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-ATF2/FITC 熒光素標記活化復制因子2抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-phospho-ATF2(Thr69/71) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠、猴磷酸化活化復制因子2(phospho ATF 2)抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
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