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人結直腸腺癌細胞；Caco-2使用說明書

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更新時間：2017-01-20 14:05:22瀏覽次數：306次

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產品簡介

人結直腸腺癌細胞；Caco-2使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一，周三，周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱	人結直腸腺癌細胞；Caco-2使用說明書
貨期	3－5天
發貨地	上海

細胞名稱 人結直腸腺癌細胞；Caco-2使用說明書
形態特性   上皮樣
生長特性貼壁生長
特征特性   此細胞株分離自一個原發性結腸癌。當細胞長滿時，表現出典型的腸細胞分化的特征。Caco-2細胞表達*酸結合蛋白I和*結合蛋白II，角蛋白陽性。
培養條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  20%FBS；1%NEAA+10mM Hepes
傳代方法   1:4~1:6傳代，細胞達80%匯合時進行傳代；每周1~2次換液。
傳代情況 P27
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養法（-）
STR   Amelogenin：X；CSF1PO：11；D13S317：11，13，14；D16S539：12，13；D18S51：12；D19S433：15；D21S11：30，32；D2S1338：17，19.2，25；D3S1358：14，17；D5S818：12，13；D7S820：11，12；D8S1179：12，14；FGA：19；TH01：6；TPOX：9，11；vWA：16，18；
同工酶
染色體   85~90，91~100
使用權限 A類

復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
itofilin   英文名稱：   線粒體內膜蛋白抗體   ?0.2ml
MMP-8   英文名稱：   基質金屬蛋白酶-8/膠原酶2抗體   ?0.1ml
MMP-11   英文名稱：   基質金屬蛋白酶11抗體   ?0.1ml
MMP-12   英文名稱：   基質金屬蛋白酶-12抗體   ?0.1ml
MMP-15   英文名稱：   基質金屬蛋白酶-15抗體   ?0.1ml
MMP-16   英文名稱：   基質金屬蛋白酶-16抗體   ?0.1ml
MMP-17   英文名稱：   基質金屬蛋白酶-17抗體   ?0.1ml
Moesin   英文名稱：   膜突蛋白抗體   ?0.1ml
Measles virus fusion protein   英文名稱：   麻疹病毒融合蛋白抗體   ?0.2ml
MPP1   英文名稱：   紅細胞膜蛋白55抗體   ?0.2ml
5-Mar   英文名稱：   膜相關環指蛋白5抗體   ?0.2mlnti-Bid/FITC 熒光素標記BH3結構域凋亡誘導蛋白抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml
Anti-AQP-2/HRP (aquaporin Protein-2) 辣根過氧化物酶標記水通道蛋白-2抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml
Anti-BIN1/FITC 熒光素標記橋連整合因子蛋白抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml
Anti-Bim/FITC 熒光素標記細胞死亡調解子抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml
Anti-phospho-Bim(Ser55) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化細胞死亡調解子抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml
Anti-Bim(phospho Ser87)/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化細胞死亡調解子抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml
Anti-phospho-Bim(Ser69) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化細胞死亡調解子抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml
Anti-BIRC5/FITC 熒光素標記細胞凋亡抑制因子5抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml
Anti-CD203c/FITC 熒光素標記CD203c抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml
Anti-CD203c/RBITC 紅色熒光素羅丹明(RBITC)標記抗CD203c抗體IgG   Multi-class antibodies   規格：   0.2ml