【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人肺癌細胞；A-427 [A427]使用說明書
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系由Giard DJ建立，源自一位52歲的肺癌男性白人患者。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS；1% NEAA,1mM丙酮酸鈉
傳代方法 1:2~1:6傳代，6~8天1次；每周換液2次。
傳代情況 C4
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法（-）
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
人肺癌細胞；A-427 [A427]使用說明書復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
人肺癌細胞；A-427 [A427]使用說明書操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
MMP-1 英文名稱： 基質金屬蛋白酶-1抗體 ?0.1ml
MMP-1 英文名稱： 基質金屬蛋白酶-1抗體 ?0.1ml
MMP13 英文名稱： 基質金屬蛋白酶13抗體 ?0.1ml
MMP-14 英文名稱： 基質金屬蛋白酶-14抗體 ?0.1ml
MMP2 英文名稱： 基質金屬蛋白酶2抗體 ?0.1ml
MMP-3 英文名稱： 基質金屬蛋白酶3抗體 ?0.1ml
MMP-7 英文名稱： 基質金屬蛋白酶-7抗體 ?0.1ml
MMP9 英文名稱： 基質金屬蛋白酶-9抗體 ?0.1mlAnti-CD226/DNAM-1/FITC 熒光素標記CD226抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CD229/SLAMF3/FITC 熒光素標記CD229抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC 熒光素標記CD244抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-TNFRSF13B/TNFRSF14B/TACI/FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子受體超家族成員13B抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CD272/BTLA/FITC 熒光素標記B和T淋巴細胞衰減蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
人肺癌細胞；A-427 [A427]使用說明書Anti-Cdc2 p34/FITC 熒光素標記周期素依賴蛋白激酶p34抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-Phospho-cdc2 (Thr14)/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素依賴激酶1抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-Phospho-cdc2 (Tyr15) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素依賴激酶1抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
