細胞名稱 人腎上腺皮質腺癌細胞；NCI-H295R使用說明書
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系源于多能腎上腺皮質癌細胞系NCI-H295，后者由Gazdar AF等建立，從腎上腺皮質的腫瘤中分離而來。NCI-H295細胞經改變培養條件獲得了NCI-295R細胞，群體倍增時間從原來的5天減為2天。NCI-295細胞懸浮生長，而NCI-H295R呈單層貼壁生長。NCI-H295R細胞保留了產生雄激素的能力，對血管緊張素Ⅱ和鉀離子有反應。
培養條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) Nu-Serum I, 2.5%；15 mM HEPES＋0.00625 mg/ml insulin＋0.00625 mg/ml transferrin＋6.25 ng/ml selenium＋1.25 mg/ml bovine serum albumin＋0.00535 mg/ml linoleic acid
傳代方法 1:3~1:4傳代；每周換液2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法（-）
STR Amelogenin：X；CSF1PO：10，12；D13S317：13；D16S539：11；D18S51：17；D19S433：13；D21S11：32.2；D2S1338：25；D3S1358：15，16；D5S818：12；D7S820：9，12；D8S1179：13；FGA：19.2，24；TH01：9.3；TPOX：8；vWA：17，18；
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
NTRH 英文名稱： 神經降壓素抗體 ?0.1ml
NCoR2 英文名稱： 核受體輔助抑制因子2抗體 ?0.2ml
Nucleophosmin 英文名稱： 核仁磷酸蛋白抗體 ?0.1ml
NCF4 英文名稱： 嗜中粒細胞胞漿因子4抗體 ?0.1ml
Phospho-NFKB p65(Ser468) 英文名稱： 磷酸化細胞核因子NF-κB p65抗體 ?0.1ml
Phospho-eNOS (Thr495) 英文名稱： 磷酸化一氧化氮合成酶3（內皮型）抗體 ?0.1ml
NIPP1 英文名稱： 核抑制蛋白磷酸酶1抗體 ?0.2ml
Nck1 英文名稱： NCK銜接蛋白1抗體 ?0.2ml
alpha Internexin 英文名稱： α-中連蛋白抗體 ?0.1ml
NR1D1 英文名稱： 細胞核受體Rev-Erbα抗體 ?0.2mlAnti-CXCL5/ENA-78/FITC 熒光素標記上皮中粒細胞活化肽78抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-GCP-2/CXCL6 /FITC 熒光素標記抗粒細胞趨化蛋白2抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CXCL7/NAP-2/PPBP/FITC 熒光素標記中粒細胞趨化蛋白2抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CXCL9/MIG/CMK/FITC 熒光素標記γ干擾素誘導單核細胞因子抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
anti-CXCL10/IP-10 /FITC 熒光素標記CXCL10趨化因子10/干擾素誘導蛋白10抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CXCL11/ITAC/FITC 熒光素標記干擾素誘導T細胞趨化因子抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-SDF-1/CXCL12 /FITC 熒光素標記基質細胞衍生因子－1抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CXCL13/BLC-1/FITC 熒光素標記B-淋巴細胞趨化因子抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CXCL14/FITC 熒光素標記CXC趨化因子14抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CXCL15/Lungkine/FITC 熒光素標記趨化因子CXCL15體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CXCL16/FITC 熒光素標記CXC趨化因子16抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-CXC-R1 /FITC 熒光素標記細胞表面趨化因子受體1抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
