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熒光素酶轉染人成骨肉瘤細胞;U2OS-Luc teT-on特性

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更新時間:2017-01-20 20:58:14瀏覽次數:397次

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產品簡介

熒光素酶轉染人成骨肉瘤細胞;U2OS-Luc teT-on特性,質量有保證、*、實驗效果好,同時我司為您提供價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明,歡迎前來選購!

詳細介紹

產品名稱生長特性發貨地貨期
熒光素酶轉染人成骨肉瘤細胞;U2OS-Luc teT-on特性貼壁生長上海3-5天

細胞名稱  熒光素酶轉染人成骨肉瘤細胞;U2OS-Luc teT-on特性
形態特性   上皮樣;多角形
生長特性  貼壁生長
特征特性   表達熒光素酶,帶四環素開關。 
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%Tet system 提供的胎牛血清;200 μg/ml G418
傳代方法   1:2~1:4傳代,每周2次換液。
傳代情況  C3
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   Amelogenin:X;CSF1PO:12,13;D13S317:13;D16S539:11,12;D18S51:12,14;D19S433:15;D21S11:31;D2S1338:20,24;D3S1358:16,OL;D5S818:8,11;D7S820:11,12;D8S1179:12,14;FGA:20;TH01:6,9.3;TPOX:11,12;vWA:14,18;
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

來源可靠(源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等),活力>95%,貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學實驗等提供全程服務。我司擁有專業的實驗室,可無菌操作并提供相關科研項目解決方案以及實驗服務。
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量*,使*的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止*作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
人神經營養因子3(NT-3)ELISA 試劑盒    96T/48T    試劑盒    組裝/原裝
人神經趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA 試劑盒    96T/48T    試劑盒    組裝/原裝
人神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA 試劑盒    96T/48T    試劑盒    組裝/原裝
人神經降壓素(NT)ELISA 試劑盒    96T/48T    試劑盒    組裝/原裝
人神經激肽B(NKB)ELISA 試劑盒    96T/48T    試劑盒    組裝/原裝
人神經激肽A(NKA) ELISA 試劑盒    96T/48T    試劑盒    組裝/原裝
人神經保護因子(CVNPF)ELISA 試劑盒    96T/48T    試劑盒    組裝/原裝
人神經氨酸酶(NA)ELISA 試劑盒    96T/48T    試劑盒    組裝/原裝
人上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA 試劑盒    96T/48T    試劑盒    組裝/原裝1-氨基-2-甲基-2-丙醇    CAS號:    2854-16-2    說明書
6,7-二甲氧基-2,4-喹唑啉二酮    CAS號:    28888-44-0    報價
方酸    CAS號:    2892-51-5    進口、國產
二氯異氰尿酸鈉    CAS號:    2893-78-9    現貨供應
Fmoc-*    CAS號:    29022-11-5    說明書
吡嗪    CAS號:    290-37-9    報價
2-氟苯磺酰氯    CAS號:    2905-21-7    進口、國產
2-氯苯磺酰氯    CAS號:    2905-23-9    現貨供應
4-乙炔聯苯    CAS號:    29079-00-3    說明書
間氯苯異氰酸酯    CAS號:    2909-38-8    報價

 

 


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