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人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H661培養(yǎng)

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產(chǎn)品簡介

人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H661培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H661培養(yǎng)
形態(tài)特性   上皮細(xì)胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   該細(xì)胞1982年建系，源自一位患有大細(xì)胞肺癌的男性的胸腔積液。該細(xì)胞角蛋白、波形蛋白陽性。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS
傳代方法   1:3～1:5傳代，每周換液2～3次
傳代情況 P46
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法（-）
STR   Amelogenin：X，Y；CSF1PO：10；D13S317：11；D16S539：12；D18S51：11；D19S433：13，14；D21S11：31，33.2；D2S1338：17；D3S1358：16；D5S818：11；D7S820：8，10；D8S1179：10；FGA：20；TH01：8；TPOX：8；vWA：17；
同工酶
染色體   130～153
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H661培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
人抗人類免疫缺陷病毒抗體(HIV)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗浦肯野細(xì)胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗皮膚抗體(ASA)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗*受體(ATR)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗*Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗腦組織抗體(ABAb)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗內(nèi)因子抗體(IFA)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝31-芐基-3-氧雜-4-哌啶甲酸乙酯   CAS號：   39514-19-7   報(bào)價(jià)
1-氯甲酰基-4-甲基   CAS號：   39539-66-7   進(jìn)口、國產(chǎn)
2-()芐溴   CAS號：   395-44-8   現(xiàn)貨供應(yīng)
哌啶-4-甲酰胺   CAS號：   39546-32-2   說明書
四溴噻吩   CAS號：   3958-03-0   報(bào)價(jià)
對溴芐胺   CAS號：   3959/7/7   進(jìn)口、國產(chǎn)
1,1-環(huán)丙烷二甲醇   CAS號：   39590-81-3   現(xiàn)貨供應(yīng)
3-氯-4-硝基苯甲酸   CAS號：   39608-47-4   說明書
3-氯-2-氨基吡啶   CAS號：   39620-04-7   報(bào)價(jià)
2-氨基-間苯二甲酸   CAS號：   39622-79-2   進(jìn)口、國產(chǎn)
4-溴喹啉   CAS號：   3964/4/3   現(xiàn)貨供應(yīng)
N-Boc-溴乙胺   CAS號：   39684-80-5   說明書