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綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 320DM-EGFP使用說明書

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產(chǎn)品簡介

綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 320DM-EGFP使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 320DM-EGFP使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 320DM-EGFP使用說明書
形態(tài)特性   上皮樣；多角形
生長特性貼壁生長
特征特性   EGFP穩(wěn)定表達(dá)
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:5~1:10傳代；2~3天換液1次。
傳代情況
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法（-）
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Anti-Ephrin B/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠Ephrin B抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Ephrin B (phospho Tyr331) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Ephrin B (phospho Tyr298) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Ephrin B (phospho Tyr324/329) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Ephrin B (phospho Tyr317) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Nestin/FITC 熒光素標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Nesfatin-1/Nucb2/FITC 熒光素標(biāo)記新的飽食分子蛋白抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Nestin/FITC 熒光素標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Nestin/RBITC 紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Nestin/RBITC 紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-NeuN/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)元核抗原抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2mlPRKD3   英文名稱：   蛋白激酶C nu型抗體   ?0.2ml
phospho-PRKD3(Ser41)   英文名稱：   磷酸化蛋白激酶C nu型抗體   ?0.1ml
phospho-PIK3C3(Ser282)   英文名稱：   磷酸化磷脂酰肌醇激酶3催化亞單位3抗體   ?0.1ml
PHGDH   英文名稱：   磷酸甘油酸脫氫酶抗體   ?0.2ml
phospho-PRL (Ser163)   英文名稱：   磷酸化泌乳素抗體   ?0.1ml
pro-caspase-3   英文名稱：   半胱天冬酶-3酶原抗體   ?0.1ml
Phospho1   英文名稱：   細(xì)胞質(zhì)磷酸酶1抗體   ?0.2ml
PHEX   英文名稱：   *低磷佝僂病蛋白   ?0.2ml
PTCHD2   英文名稱：   多通道膜蛋白PTCHD2抗體   ?0.2ml
PTCHD3   英文名稱：   修補(bǔ)相關(guān)蛋白PTCHD3抗體   ?0.2ml
PKMYT1   英文名稱：   髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激酶抗體   ?0.1ml
phospho-PKMYT1(Thr495)   英文名稱：   磷酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激酶抗體   ?0.1ml