| 產品名稱 | 生長特性 | 發貨地 | 貨期 |
| Cas9穩定表達的人肺癌細胞；A549-Cas9-538復蘇 | 貼壁生長 | 上海 | 3－5天 |
細胞名稱 Cas9穩定表達的人肺癌細胞；A549-Cas9-538復蘇
形態特性 上皮樣；多角形
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使A549細胞穩定表達Cas9-Flag-Neo，經400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術編輯基因組DNA。
培養條件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法 1:3~1：8傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法（-）
STR Amelogenin：X,Y；CSF1PO：10,12；D12S391：18,19；D13S317：11,11；D16S539：11,12；D18S51：14,17；D19S433：29,29；D21S11：29,29；D2S1338：24,24；D3S1358：16,16；D5S818：11,11；D6S1043：11,13；D7S820：8,11；D8S1179：13,14；FGA：23,23；Penta E：7,11；TH01：8,9.3；TPOX：8,11；vWA：14,14；
同工酶
染色體
使用權限 A類
來源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學實驗等提供全程服務。我司擁有專業的實驗室，可無菌操作并提供相關科研項目解決方案以及實驗服務。
細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量*，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
人操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量*，使*的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。
Anti-phospho GAP-43(pSer41)/FITC 熒光素標記抗磷酸化神經生長相關蛋白43抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-phospho-FAK(pSer732)/FITC 熒光素標記抗磷酸化粘著斑激酶抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-phosphor-PAK1+PAK2+PAK3 (pSer141)/FITC 熒光素標記抗磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-phospho-PAK1/2/3(pThr423)/FITC 熒光素標記抗磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-phospho-PAK1(pSer144)/FITC 熒光素標記抗磷酸化p21激活激酶1抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-phospho-PAK2(pSer141)/FITC 熒光素標記抗磷酸化p21激活激酶2抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-JNK1/2/3/FITC 熒光素標記抗氨基末端激酶1/2/3抗體 IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-phospho-PAK3(pSer139)/FITC 熒光素標記抗磷酸化p21激活激酶3抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-Stanniocalcin 1/FITC 熒光素標記斯鈣素抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-PAK1/FITC 熒光素標記p21激活激酶1抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) /FITC 熒光素標記磷酸化p21激活激酶1/2抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2mlphospho-RAD9(Ser380) 英文名稱： 磷酸化細胞周期檢查控制蛋白質抗體 ?0.1ml
phospho-RAD9(Ser387) 英文名稱： 磷酸化細胞周期檢查控制蛋白質抗體 ?0.1ml
phospho-RAD9(Tyr28) 英文名稱： 磷酸化細胞周期檢查控制蛋白質抗體 ?0.1ml
phospho-c-Raf(Ser301) 英文名稱： 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 ?0.1ml
phospho-c-Raf(Ser494) 英文名稱： 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 ?0.1ml
phospho-c-Raf(Ser43) 英文名稱： 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 ?0.1ml
phospho-c-Raf(Ser471) 英文名稱： 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 ?0.1ml
phospho-c-Raf(Tyr341) 英文名稱： 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 ?0.1ml
phospho-c-Raf(Thr269) 英文名稱： 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 ?0.1ml
phospho-c-Raf(Ser339) 英文名稱： 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 ?0.1ml
