【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 Cas9穩定表達的人前列腺癌細胞；DU145-Cas9-540使用說明書
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使Du145細胞穩定表達Cas9-Flag-Neo，經400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術編輯基因組DNA。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法 1:4~1:6傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法（-）
STR Amelogenin：x,y；CSF1PO：10,11：D12S391：18,20；D13S317：12,14；D16S539：11,11；D18S51：12,12；D19S433：13,13；D21S11：31,32,33；D2S1338：16,16；D3S1358：16,16；D5S818：10,13；D6S1043：11,11；D7S820：7,10,11；D8S1179：13,14；FGA：22,22；Penta E：12,12；TH01：7,7；TPOX：11,11；vWA：17,18；
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Phospho-Rb (Ser612) 英文名稱： 磷酸化視網膜母細胞瘤相關蛋白1抗體 ?0.1ml
Phospho-P105 RB (Ser788) 英文名稱： 磷酸化視網膜母細胞瘤相關蛋白1抗體 ?0.1ml
phospho-RPS6KB1(Ser417) 英文名稱： 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 ?0.1ml
phospho-RPS6KB1(Ser427) 英文名稱： 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 ?0.1ml
Phospho-Rb (Ser795) 英文名稱： 磷酸化視網膜母細胞瘤相關蛋白1抗體 ?0.1ml
Phospho-Rb (Thr826) 英文名稱： 磷酸化視網膜母細胞瘤相關蛋白1抗體 ?0.1ml
phospho-RPS6KB1(Thr 412) 英文名稱： 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 ?0.1ml
phospho-RPS6KB1(Ser434) 英文名稱： 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 ?0.1mlAnti-PAK2 /FITC 熒光素標記p21激活激酶2抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-Phospho-PAK2 (Ser20) /FITC 熒光素標記磷酸化p21激活激酶2抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-PAK4/FITC 熒光素標記p21激活激酶4抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Phospho-PAK4 (Ser474)/PAK5 (Ser602)/PAK6 (Ser560) /FITC 熒光素標記磷酸化p21激活激酶4、5、6抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-PAK7/PAK5/MBT/FITC 熒光素標記抗激活激酶PAK7/PAK5抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti--phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) /FITC 熒光素標記抗磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr421/Ser424) /FITC 熒光素標記磷酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-phospho-P70 S6 Kinase beta (Ser371)/FITC 熒光素標記磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-phospho-STAT1(pThr701)/FITC 熒光素標記抗磷酸化信號轉導與轉錄激活因子1抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-phospho-STAT3(pThr705)/FITC 熒光素標記抗磷酸化信號轉導和轉錄激活因子3抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
Anti-JNK2/FITC 熒光素標記氨基末端激酶2抗體IgG Multi-class antibodies 規格： 0.2ml
