Cas9穩(wěn)定表達的人前列腺癌細胞；DU145-Cas9-539特性來源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學實驗等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實驗室，可無菌操作并提供相關(guān)科研項目解決方案以及實驗服務(wù)。
| 產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 發(fā)貨地 | 貨期 |
| Cas9穩(wěn)定表達的人前列腺癌細胞；DU145-Cas9-539特性 | 貼壁生長 | 上海 | 3－5天 |
細胞名稱
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使Du145細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法 1:4~1:6傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR Amelogenin：x,y；CSF1PO：10,11；D12S391：18,21；D13S317：12,13；D16S539：11,11；D18S51：12,12；D19S433：13,13；D21S11：30,33,34；D2S1338：16,16；D3S1358：16,16；D5S818：10,13；D6S1043：11,11；D7S820：7,11；D8S1179：13,14；FGA：22,22；Penta E：12,14；TH01：7,7；TPOX：11,11；vWA：17,19；
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量*，使*的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
Anti-phospho-STAT6(pThr641)/FITC 熒光素標記抗磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho-Src(pTyr529)/FITC 熒光素標記抗磷酸化Src原癌基因抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho c-Raf/RAF1(pSer338/pTyr340)/FITC 熒光素標記抗磷酸化原癌基因c-raf抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho-c-Raf (Ser289) /FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho-c-Raf (Ser259)/FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho-c-Raf (Ser296) /FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho-c-Raf (Ser338) /FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho C-Myc(pThr58/pSer62)/FITC 熒光素標記抗磷酸化致癌基因C-Myc抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho C-Met/pHGFR(pTyr1365)/FITC 熒光素標記抗磷酸化原癌基因c-Met抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho-c-Jun/AP-1(pThr91/pThr93)/FITC 熒光素標記抗磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho-c-Jun (Ser243) /FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-phospho-c-Jun (Thr93) /FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2mlhospho-RPS6KB1(Ser421) 英文名稱： 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 ?0.1ml
phospho-RPS6KB1(Ser441+Thr444) 英文名稱： 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 ?0.1ml
phospho-ROCK2(Thr396) 英文名稱： 磷酸化Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體 ?0.1ml
phospho-ROCK2(Thr249) 英文名稱： 磷酸化Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體 ?0.1ml
phospho-ROCK2(Tyr256) 英文名稱： 磷酸化Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體 ?0.1ml
phospho-RGS19(Ser22) 英文名稱： 磷酸化G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體 ?0.1ml
phospho-RAD51(Thr309) 英文名稱： 磷酸化Rad51抗體 ?0.1ml
Phospho-RSK2(Ser369) 英文名稱： 磷酸化核糖體S6激酶RSK2抗體 ?0.1ml
phospho-RPS6KA1(Thr359) 英文名稱： 磷酸化*/*激酶p90RSK蛋白抗體 ?0.1ml
phospho-RPS6KA1(Thr348) 英文名稱： 磷酸化磷酸化*/*激酶p90RSK蛋白抗體 ?0.1ml
phospho-RPS6KA1(Ser363) 英文名稱： 磷酸化*/*激酶p90RSK蛋白抗體 ?0.1ml
