【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達的人胰腺癌細胞；PANC-1-Cas9-557培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣；多角形
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使PANC-1細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術編輯基因組DNA。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法 1:2~1:4傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR Amelogenin：x,x；CSF1PO：10,12；D12S391：22,22；D13S317：11,11；D16S539：11,11；D18S51：12,12；D19S433：11,16；D21S11：28,28；D2S1338：23,24；D3S1358：17,17；D5S818：11,13；D6S1043：11,12；D7S820：8,10；D8S1179：14,15；FGA：21,21；；Penta E：7,14；TH01：7,8；TPOX：8,11；vWA：15,15；
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Anti-P-HP1/FITC 熒光素標記抗異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體（果蠅）IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-P-HP1/FITC 熒光素標記抗異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體（果蠅）IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-PKR (Thr446) /FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶R抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-PKR (Thr451) /FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶R抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-PKR (Thr446/451) /FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶R抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) /FITC 熒光素標記磷酸化內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長因子抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-HSP-90 Alpha/HRP 辣根過氧化物酶標記熱休克蛋白90α抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-HSP-90 Beta /HRP 辣根過氧化物酶標記熱休克蛋白90β抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-CD4/HRP 辣根過氧化物酶標記CD4抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Insulin/HRP 辣根過氧化物酶標記胰島素抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-PLAU/uPA/FITC 熒光素標記*型纖溶酶原激活因子抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2mlRPS27A 英文名稱： RPS27A抗體 ?0.2ml
RANK 英文名稱： 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體(核因子kB受體活化因子) ?0.1ml
ROR alpha 英文名稱： 維甲酸相關孤兒受體α抗體 ?0.2ml
RSV Nucleoprotein 英文名稱： 呼吸道合胞病毒核蛋白抗體 ?0.2ml
RSK3 英文名稱： 核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體 ?0.2ml
RCCD1 英文名稱： RCCD1蛋白抗體 ?0.1ml
phospho-RAD9(Ser328) 英文名稱： 磷酸化細胞周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體 ?0.1ml
phospho-REC8(Ser251) 英文名稱： 磷酸化減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體 ?0.1ml
RENT1+hUPF1 英文名稱： ATP依賴解旋酶RENT1抗體 ?0.2ml
RERG 英文名稱： Ras相關雌激素調(diào)節(jié)生長抑制蛋白 ?0.2ml
