【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達的人前列腺癌細胞；PC-3-Cas9-579培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長,在軟瓊脂中成簇生長，并可懸浮生長
特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使PC-3細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。
培養(yǎng)條件 F12K 10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法 1:3~1:6傳代；每周2~3次換液。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR Amelogenin：x,x；CSF1PO：11,11；D12S391：21,21；D13S317：11,11；D16S539：11,11；D18S51：14,15；D19S433：14,14；D21S11：29,31.2；D2S1338：18,20；D3S1358：16,16；D5S818：13,13；D6S1043：18,18；D7S820：8,11；D8S1179：13,13；FGA：24,24；Penta E：10,17；TH01：6,7；TPOX：8,9；vWA：17,17；
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
phospho-RPA2(Thr21) 英文名稱： 磷酸化復(fù)制因子A蛋白2抗體 ?0.1ml
RPH3AL 英文名稱： Ras相關(guān)GTP結(jié)合蛋白抗體 ?0.2ml
phospho-Rab24(Ser95) 英文名稱： 磷酸化ras基因相關(guān)蛋白Rab24抗體 ?0.1ml
phospho-Rab24(Tyr17) 英文名稱： 磷酸化ras基因相關(guān)蛋白Rab24抗體 ?0.1ml
phospho-RGS19(Ser24) 英文名稱： 磷酸化G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體 ?0.1ml
phospho-RGS19(Ser151) 英文名稱： 磷酸化G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體 ?0.1ml
phospho-RPS6KA1(Ser352) 英文名稱： 磷酸化*/*激酶p90RSK蛋白抗體 ?0.1ml
phospho-RAD51(Tyr315) 英文名稱： 磷酸化Rad51抗體 ?0.1ml
phospho-RUNX2(Ser451) 英文名稱： 磷酸化成骨特異轉(zhuǎn)錄因子抗體 ?0.1mlAnti-Sema3A/FITC 熒光素標記臂板蛋白3A抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Slc22A17/FITC 熒光素標記可溶載質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白22A17抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-SMC1 (Ser360) /FITC 熒光素標記磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-SMC1 (Ser957)/FITC 熒光素標記磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-SMN1/FITC 熒光素標記運動神經(jīng)元生存蛋白1抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Snail/FITC 熒光素標記抗Snail蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Snake poison Protein/FITC 熒光素標記抗蛇毒蛋白抗體（蝮蛇）IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Snake poison Protein/FITC 熒光素標記抗蛇毒蛋白抗體（中華眼鏡蛇）IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-SNAP-25 /FITC 熒光素標記突觸相關(guān)蛋白25抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Socs 1/FITC 熒光素標記細胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Socs 2/FITC 熒光素標記細胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白2抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Socs 3/FITC 熒光素標記細胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白3抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-SOD1/FITC 熒光素標記超氧化物歧化酶1抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
