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人肝癌細胞；BEL-7402使用說明書

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更新時間：2017-01-21 11:09:53瀏覽次數(shù)：119次

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產(chǎn)品簡介

人肝癌細胞；BEL-7402使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

產(chǎn)品名稱	人肝癌細胞；BEL-7402使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 人肝癌細胞；BEL-7402使用說明書
形態(tài)特性   上皮細胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   　BEL-7402細胞株是1974年從臨床肝癌手術(shù)標本中建立的。細胞群體倍增時間為20小時。移植到處理過的wistar大鼠中的能形成腫瘤結(jié)節(jié)。細胞形態(tài)呈上皮樣細胞。在電子顯微鏡下亦顯示上皮細胞所具有的橋粒和張力原纖維，與臨床肝癌細胞相似。分瓶培養(yǎng)第四天時，其有絲分裂指數(shù)約為7%。 BEL-7402細胞的染色體數(shù)為不足三倍體，有一個異常的近端著絲點染色體。間接免疫熒光法測BEL-7402細胞內(nèi)的AFP為陽性反應(yīng)。 LDH同工酶譜顯示與成年人肝細胞不同，而與人胚肝及臨床肝癌相近。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清，10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測陰性
STR   Amelogenin:X；CSF1PO:10；D13S317:13.3；D16S539:9,10；D18S51:16；D19S433:13；D21S11:27,28；D2S1338:17；D3S1358:15,18；D5S818:12；D7S820:12；D8S1179:12；FGA:18,21；TH01:7；TPOX:12；vWA:16,18
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
TIP30   英文名稱：   TIP30蛋白抗體   ?0.2ml
phospho-TCF3(Thr355)   英文名稱：   磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體   ?0.1ml
phospho-TCF3 (Ser39)   英文名稱：   磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體   ?0.1ml
Tbx21   英文名稱：   T細胞介導的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Tbx21抗體   ?0.1ml
Phospho-TrkA(Tyr496) +TrkB(Tyr516)   英文名稱：   磷酸化*激酶A抗體   ?0.1ml
Phospho-TrkA (Tyr785)+TrkB (Tyr816)   英文名稱：   磷酸化*激酶A抗體   ?0.1ml
Phospho-Tuberin (Ser1254)   英文名稱：   磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)硬化)抗體   ?0.1ml
Phospho-Tyk2(Tyr1054 + Tyr1055)   英文名稱：   磷酸化非受體*蛋白激酶2抗體   ?0.1ml
Phospho-Troponin I(Ser23 + Ser24)   英文名稱：   磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體   ?0.1ml
Phospho-TORC2 (Ser171)   英文名稱：   磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體   ?0.1ml
TRP2   英文名稱：   *酶相關(guān)蛋白2抗體   ?0.2mlTris 鹽酸   TRIS HYDROCHLORIDE       5 KG   超純級
乙二胺四乙酸四鈉   EDTA, TETRASODIUM SALT           超純級
乙二胺四乙酸四鈉   EDTA TETRASODIUM SALT ANHYDROUS   13235-36-4   500G   超純級
碳酸鈉,無水   SODIUM CARBONATE   497-19-8   1KG   試劑級
硫酸錳,一水   MANGANESE SULFATE MONOHYDRATE   10034-96-5   1KG   試劑級
*1：300   TRYPSIN 1:300   9002-07-7   25G   組織培養(yǎng)級
*1：300   TRYPSIN 1:300   9002-07-7   50G   組織培養(yǎng)級
5’- 三磷酸鳥苷三鈉   GUANOSINE-5'-TRIPHOSPHATE*DRYICE   36051-31-7   100MG   超純級
5’- 三磷酸鳥苷三鈉   GUANOSINE-5'-TRIPHOSPHATE*DRYICE   36051-31-7   50MG   超純級
巰基乙酸鈉   THIOGLYCOLIC ACID SODIUM SALT   367-51-1   100G   高純級
硫酸鋅   ZINC SULFATE, HEPTAHYDRATE   7446-20-0   500G   試劑級