【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人喉癌上皮細胞；Hep-2使用說明書
形態特性 上皮細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 zui初認為這個細胞源自喉上皮癌，但隨后通過同功酶分析、HeLa標記染色體和DNA指紋分析發現，起源細胞已被HeLa污染。 角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清，20%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
RNF9 英文名稱： 環指蛋白9抗體 ?0.2ml
TIMP-1(CT) 英文名稱： 金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（C端） ?0.1ml
Tex19A 英文名稱： 表達蛋白19A抗體 ?0.1ml
TASK 3 英文名稱： 酸敏感鉀離子通道蛋白抗體 ?0.2ml
TNFAIP8 英文名稱： 腫瘤壞死因子α誘導蛋白8抗體 ?0.2ml
TBCD4 英文名稱： TBC結構域TBCD4蛋白抗體 ?0.2ml
TRIP 英文名稱： 腫瘤壞死因子受體相互作用蛋白抗體 ?0.1ml
TRAF4 英文名稱： 腫瘤壞死因子受體相關蛋白4抗體 ?0.1ml
TCTN1 英文名稱： 結構蛋白家族1抗體 ?0.2ml
TFF1 英文名稱： 癌雌激素誘導蛋白抗體 ?0.1ml鹽酸胍 GUANIDINE HYDROCHLORIDE 2050/1/1 500G 生物技術級
氯化鎂,六水 MAGNESIUM CHLORIDE HEXAHYDRATE 7791-18-6 100G ACS級
氯化鎂,六水 MAGNESIUM CHLORIDE HEXAHYDRATE 7791-18-6 1KG ACS級
氯化鎂,六水 MAGNESIUM CHLORIDE HEXAHYDRATE 7791-18-6 500G ACS級
氯化鎂,六水 MAGNESIUM CHLORIDE 5KG ACS級
3-氨基-9-乙基咔唑 3-AMINO-9-ETHYL CARBAZOLE 132-32-1 100 G 試劑級
3-氨基-9-乙基咔唑 3-AMINO-9-ETHYL CARBAZOLE 132-32-1 50G 試劑級
碘硝基四唑紫 INT DYE 146-68-9 1G 高純級
碘硝基四唑紫 INT DYE 146-68-9 500MG 高純級
阿利新藍 8 GX ALCIAN BLUE 33864-99-2 100G 高純級
碳酸銨 AMMONIUM CARBONATE 506-87-6 1KG ACS級
碳酸銨 AMMONIUM CARBONATE 506-87-6 2.5KG ACS級
