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人肝癌細(xì)胞；SMMC-7721使用說明書

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產(chǎn)品簡介

人肝癌細(xì)胞；SMMC-7721使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 人肝癌細(xì)胞；SMMC-7721使用說明書
形態(tài)特性   上皮細(xì)胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   用Northern blot方法，未能檢測到細(xì)胞中1.3kb LFIRE-1/HFREP-1 mRNA的表達(dá)。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清，10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測陰性
STR   Amelogenin:X；CSF1PO:10；D13S317:13.3；D16S539:9,10；D18S51:16；D19S433:13；D21S11:27,28；D2S1338:17；D3S1358:15,18；D5S818:12；D7S820:12；D8S1179:12；FGA:18,21；TH01:7；TPOX:12；vWA:16,18
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	人肝癌細(xì)胞；SMMC-7721使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
NZCYM瓊脂   NZCYM Agar   100克   BR
NZCYM肉湯   NZCYM Broth   100克   BR
皰肉牛肉粒   Dried Meat Particle   100克   加入苞肉基礎(chǔ)中配成苞肉培養(yǎng)基
SOB肉湯   SOB Broth   250克   BR
SOB瓊脂   SOB Agar   250克   BR
SOC肉湯   SOC Broth   250克   用于基因工程菌大腸桿菌培養(yǎng)
超級肉湯   Super Broth   250克   BR
超級瓊脂   Super Agar   250克   BR
TYGPN培養(yǎng)基   TYGPN Medium   250克   BR
印度墨水   Indian ink   100毫升   炭疽桿菌檢測用配套試劑
碘附   Iodophor   500克   炭疽桿菌檢測用配套試劑
Campy-Cefex添加劑   Campy-Cefex Supplement   2毫升×10支   添加于200ml CAMPY-CEFEX瓊脂基礎(chǔ)中
CLED培養(yǎng)基添加劑   CLED Medium Supplement   1毫升×5支   加入100mlC.L.E.D培養(yǎng)基中
7% NaC1胰胨水發(fā)酵管   7% NaC1胰胨水發(fā)酵管   20支   BRTetanus toxin light chain   英文名稱：   破傷風(fēng)毒素輕鏈抗體   ?0.1ml
Tubb3/Tubulin beta 3   英文名稱：   微管蛋白β3抗體   ?0.1ml
TNFRSF13B   英文名稱：   腫瘤壞死因子受體超家族成員13B抗體   ?0.2ml
TXNDC4   英文名稱：   內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白44抗體   ?0.1ml
URG4 (C terminal)   英文名稱：   上調(diào)基因4抗體（C端）   ?0.2ml
Urocortin 3   英文名稱：   尿皮質(zhì)素UCN3抗體   ?0.1ml
Uromucoid   英文名稱：   尿調(diào)節(jié)蛋白抗體   ?0.1ml
UFD1L   英文名稱：   泛素融合降解樣蛋白1抗體   ?0.2ml
USP9X   英文名稱：   泛素特異蛋白酶9X抗體   ?0.2ml
USP10   英文名稱：   去泛素酶10抗體   ?0.2ml
GPR14   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體14抗體   ?0.1ml