人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；WERI-Rb-1培養(yǎng)

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更新時間：2017-01-23 09:27:20瀏覽次數(shù)：191次

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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；WERI-Rb-1培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱	人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；WERI-Rb-1培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；WERI-Rb-1培養(yǎng)
形態(tài)特性   圓形細(xì)胞聚集成葡萄狀
生長特性貼壁生長
特征特性   WERI-Rb-I細(xì)胞株是1974年R.M. McFall 和 T.W. Sery建立的兩株人眼癌細(xì)胞系中的一株。細(xì)胞能在Difco Bacto-Agar中存活但不形成克隆。掃描電鏡顯示在表面囊泡，板狀偽足和微絨毛在數(shù)量上和頻率上的改變。細(xì)胞分化研究，*的動物模型和生化評價都涉及這株細(xì)胞。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基   250(g)
*顯色培養(yǎng)基   5000mL/瓶
mEI瓊脂（腸球菌顯色培養(yǎng)基）   1000mL/瓶
改良O157顯色培養(yǎng)基A   1000 mL/瓶
改良O157顯色培養(yǎng)基B   25000 mL
BPL Agar Brilliant-green phenol-red lactose agar acc.to KAUFFMANN   1.07236.0500   MERCK默克
亮綠酚紅乳糖瓊脂
BPLS Agar Brilliant-green phenol-red lactose sucrose agar   1.07237.0500   MERCK默克
亮綠酚紅乳糖蔗糖瓊脂
BPLS Agar Brilliant-green phenol-red-lactose sucrose agar   1.07232.0500   MERCK默克
USP 亮綠酚紅乳糖蔗糖瓊脂USP
BPLS Agar Brilliant-green phenol-red-lactose sucrose agar modified   1.10747.0500   MERCK默克
亮綠酚紅乳糖蔗糖改良瓊脂                   APOJ   載脂蛋白J抗體
APOH   載脂蛋白H抗體
ART4   二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶4抗體
AKIRIN2   AKIRIN2蛋白抗體
ARL8B   ADP核糖基化樣因子8B抗體
ATAD2   三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體
AKIRIN1   AKIRIN1蛋白抗體
ASZ1   錨定蛋白樣蛋白1抗體
Adenylate kinase 2   腺苷酸激酶2抗體
AEBP1   脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1
AKT1   蛋白激酶B
AKT1   蛋白激酶B
ANGL2   血管生成素樣蛋白2抗體
Angiopoietin 4   血管生成素3/血管生成素4抗體
Annexin I   膜粘連蛋白 I抗體

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