【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人膀胱移行細胞癌；UM-UC-3培養
形態特性 上皮樣；多角
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優質胎牛血清，10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況 P(127+5)
凍存條件 *培養基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 B類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
DEV Lactose peptone broth DEV乳糖蛋白胨肉湯 1.10690.0500 MERCK默克
Dichloran GlycerolAgar （DG18） Dichloran 甘油瓊脂（DG18） 1.00445.0500 MERCK默克
Dichloran Rose-Bengal Chloramphenicol Agar Dichloran 1.00466.0500 MERCK默克
羅斯-孟加拉*瓊脂
DEV nutrient agar for microbiology DEV營養瓊脂 1.11471.0500 MERCK默克
DEV nutrient gelatin DEV營養明膠 1.10691.0500 MERCK默克
DEV tryptophan broth DEV*肉湯 1.10694.0500 MERCK默克
Dextrose casein-peptone agar 葡萄糖酪蛋白瓊脂 1.10860.0500 MERCK默克
DHL agar acc.to SAKAZAKI 甲基吡啶硫化氫乳糖瓊脂 1.11435.0500 MERCK默克
DIASALM acc.to VAN NETTEN and VAN der ZEE DIASALM培養基 1.09803.0500 MERCK默克
DCA agar acc.to Weenk et al 梭狀芽孢桿菌鑒別瓊脂 1.10259.0500 MERCK默克
Dnase test agar DNA酶測試瓊脂 1.10449.0501 MERCK默克
EC Broth EC肉湯 1.10765.0502 MERCK默克
Agar EMB Eosin methylene-blue lactose sucrose agar 1.01347.0503 MERCK默克 hospho-ADAM17 (Thr735) 磷酸化CD156b抗體
ADH5 乙醇脫氫酶5抗體
ADH6 乙醇脫氫酶6抗體
phospho-AMPK alpha 2 (Ser176) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體
phospho-AMPK alpha 2 (Ser491) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體
phospho-Androgen Receptor (Ser515) 磷酸化雄激素受體抗體
phospho-Androgen Receptor (Ser791) 磷酸化雄激素受體抗體
phospho-Androgen Receptor (Ser94) 磷酸化雄激素受體抗體
phospho-Androgen Receptor (Tyr363) 磷酸化雄激素受體抗體
ANKK1 錨定蛋白重復結構域蛋白激酶ANKK1抗體
phospho-alpha Adducin (Thr445) 磷酸化內收蛋白抗體
Annexin A11 膜粘連蛋白11抗體
