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人結(jié)直腸癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞；T84使用說明書

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產(chǎn)品簡介

人結(jié)直腸癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞；T84使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 人結(jié)直腸癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞；T84使用說明書
形態(tài)特性   上皮樣；多角
生長特性貼壁生長
特征特性   表達(dá)神經(jīng)遞質(zhì)受體和肽類激素受體　
培養(yǎng)條件   DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代；3-4天一次
傳代情況 PN
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類

產(chǎn)品名稱	人結(jié)直腸癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞；T84使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Standard nutrient agar標(biāo)準(zhǔn)I營養(yǎng)瓊脂   1.07881.0500   MERCK默克
Standard nutrient broth 標(biāo)準(zhǔn)I營養(yǎng)瓊脂   1.07882.0500   MERCK默克
Standard 11 nutrient agar標(biāo)準(zhǔn)11營養(yǎng)瓊脂   1.07883.0500   MERCK默克
Staphylococcus enrichment broth( base)acc.to BAIRD葡萄狀球菌富集肉湯（基礎(chǔ)）   1.07899.0500   MERCK默克
TB medium acc.to LOENSTIN-JENSEN( base) TB培養(yǎng)基（基礎(chǔ)）   1.05400.0500   MERCK默克
TCBS agar Vibrio selective agar TCBS瓊脂/弧菌選擇瓊脂   1.10263.0500   MERCK默克
Test agar fo the residue test acc.to KUNDRAT測試瓊脂（殘余測試）   1.10662.0500   MERCK默克
Agar test PH6.0 for the inhibitor test測試瓊脂PH6.0（抑制劑測試）   1.10663.0500   MERCK默克
Test test PH7.2 for the inhibitor test測試瓊脂PH7.2（抑制劑測試）   1.15787.0500   MERCK默克
Test test PH8.0for the inhibitor test測試瓊脂PH8.0（抑制劑測試）   1.10664.0500   MERCK默克
Tetrathionate enrichment broth( base) acc.to MULLER-KAUFFMAN   1.10863.0500   MERCK默克
TGE agar Tryptone glucose extract agarTCE 瓊脂/胰蛋白胨葡萄糖瓊脂   1.10128.0500   MERCK默克
THAYER-MARTIN agar base THAYER-MARTIN瓊脂基礎(chǔ)/奈瑟氏菌選擇培養(yǎng)基   1.10728.0500   MERCK默克
THAYER-MARTIN supplement1( VCT inhibitor combination)   1.10729.0001   MERCK默克           AHNAK2   AHNAK核蛋白2抗體
ARL6   二磷酸腺苷核糖基化因子6相互作用蛋白抗體
ANO9   p53誘導(dǎo)蛋白5抗體
ANKRD5   錨蛋白重復(fù)域5抗體
ACCN2   腦鈉通道蛋白2抗體
ACCN4   腦鈉通道蛋白4抗體
ACCN5   小腸鈉通道蛋白5抗體
APXL   APXL蛋白抗體
ASIC3   酸敏感離子通道蛋白3抗體
Aspartate beta hydroxylase   天*β羥化酶抗體
AVPR2   *加壓素受體2抗體
ARP3   細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白樣蛋白3抗體
AACTH (18-39)   促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH(18-39)抗體
ACTH (7-23)   促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH (7-23)抗體
ADNP   活依賴的神經(jīng)保護(hù)肽抗體