人Burkitt淋巴瘤細胞；Daudi使用說明書

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更新時間：2017-01-23 10:22:12瀏覽次數(shù)：262次

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產(chǎn)品簡介

人Burkitt淋巴瘤細胞；Daudi使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	人Burkitt淋巴瘤細胞；Daudi使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 人Burkitt淋巴瘤細胞；Daudi使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性懸浮生長
特征特性   1967年，該細胞系E. Klein 和 G. Klein建系，源于一名16歲患有Burkitt's淋巴瘤的黑人男性，beta-2-微球蛋白陰性，表達EBNA, VCA，sIg。該細胞攜帶EB病毒，是一個典型的B淋巴母細胞系，可用于引起白血病機制的研究。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C5
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR   STR鑒定
同工酶
染色體
使用權限 A類

復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
BBFSP2   晶狀體蛋白2抗體
C7orf27   7號染色體開放閱讀框27抗體
BCMP101   癌膜相關蛋白101抗體
BRLF1   立即早期癌基因BRLF1抗體（鼻咽癌基因）
BDNF   腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體
BACE2   β淀粉樣前體蛋白裂解酶2抗體
BHLHB5   螺旋一環(huán)一螺旋蛋白5抗體
BPNT1   二磷酸3核苷酸酶抗體
BRSK2   腦蛋白*/*激酶29抗體
BRWD3   智力發(fā)育調(diào)節(jié)相關蛋白BRWD3抗體
BTD   *酶抗體
Bif   Bax相互作用因子1抗體產(chǎn)氣莢膜菌瓊脂基礎 (TSC/SFP) (CM0587)   Oxoid
BiGGY 瓊脂 (Nickerson 培養(yǎng)基) (CM0589)   Oxoid
*七葉甙疊氮瓊脂基礎(CM0591)   Oxoid
胰蛋白胨膽汁瓊脂 (CM0595)   Oxoid
艱難梭菌瓊脂基礎 (CM0601)   Oxoid
改良*鹽礦物培養(yǎng)基(CM0607)   Oxoid
*選擇瓊脂基礎(CM0617)   Oxoid
Wilkins-Chalgren 厭氧瓊脂 (Wilkins － Chalgren Anaerobe Agar)   Oxoid   500g
Rogosa 瓊脂 (CM0627)   Oxoid
營養(yǎng)明膠 (CM0135a)   Oxoid
Vogel-Johnson 瓊脂 (CM0641)   Oxoid
Wilkins-Chalgren Anaerobe Broth/Wilkins Chalgren 厭氧肉湯   Oxoid   500G
通用啤酒瓊脂 (CM0651)   Oxoid
耶爾森選擇瓊脂基礎(CIN 瓊脂基礎/Schiemann 培養(yǎng)基基礎) (CM0653)   Oxoid
軍團菌 CYE 瓊脂基礎 (CM0655)   Oxoid
橙血清瓊脂 (CM0657)   Oxoid