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上海撫生實業有限公司
人子宮內膜腺癌細胞;KLE使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
產品名稱 | 人子宮內膜腺癌細胞;KLE使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 人子宮內膜腺癌細胞;KLE使用說明書
形態特性 上皮樣;多角
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系源自一名64歲白人女性的子宮內膜腫瘤組織,由GR Richardson于1984年建系。細胞染色體為非整倍體,數目范圍在51-66之間。裸鼠植瘤后,其腫瘤標本在電鏡下顯示,細胞間見緊密相連,細胞表面具有微絨毛。其形態特征與孕激素刺激后的子宮內膜相似。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C11
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
12205 鏈球菌疫苗培養基 1 萬 ml/袋 培養鏈球菌,用于豬及羊鏈球菌滅活菌苗和檢驗
12206 豬丹毒疫苗培養基 1 萬 ml/袋 用于豬丹毒滅活菌苗、活菌苗
12207 豬肺疫疫苗培養基 1 萬 ml/袋 用于豬肺疫疫苗制備
12208 馬丁肉湯 250g/瓶 用于多殺性巴桿菌、豬丹毒菌、豬肺疫、鏈球菌菌苗及檢驗
12210 馬丁瓊脂 250g/瓶 用于多殺性巴桿菌、豬丹毒菌、豬肺疫、鏈球菌菌苗及檢驗
12211 仔豬副傷寒疫苗培養基 1 萬 ml/袋 用于仔豬副傷寒菌疫苗的
12212 改良 Minca 培養基基礎 250g/瓶 用于大腸埃希氏菌 K88、K99、987P 菌株,每升培養基中需添加5ml 甘油
12213 雞毒支原體疫苗培養基 1 萬 ml/袋
22201 無菌輔酶Ⅰ(NAD)溶液 25mg×10 支/盒
22202 無菌*溶液 80 萬單位×10 支/盒
11901 MS 培養基 250g/瓶 含瓊脂,廣泛用于植物的器官、花 藥、細胞和原生質體的培養
11902 1Kg/袋
11903 MS 培養基(1/2 蔗糖) 250g/瓶 蔗糖 15g/L,用于植物組織培養
11904 1Kg/袋
11905 MS 培養基(1/2 蔗糖、不含瓊脂) 250g/瓶 蔗糖 15g/L,不含瓊脂,用于植物 組織培養
11906 1Kg/袋 PNK1 多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體
BRCA1 癌易感基因1抗體
Bak Bcl-2同源拮抗劑抗體
beta 3 Adrenergic Receptor β3腎上腺素能受體抗體
BNP 腦鈉素/利鈉肽抗體
BZW2 BZW2蛋白抗體
BDKRB1 緩激肽B1受體抗體
BK channel 鈣激活鉀通道蛋白α1抗體
Bestrophin 2 卵黃狀黃斑病蛋白2抗體
BRSK1 */*蛋白激酶SAD-B抗體
BRD7 鼻咽癌相關轉錄調節蛋白抗體
Creatine kinase B type 腦肌酸激酶BCK抗體
beta glucuronidase β葡萄糖醛酸苷酶抗體
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