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人肺鱗癌細(xì)胞；LTEP-S使用說明書

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

人肺鱗癌細(xì)胞；LTEP-S使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

人肺鱗癌細(xì)胞；LTEP-S使用說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	人
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 人肺鱗癌細(xì)胞；LTEP-S使用說明書
形態(tài)特性   上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞是一株人肺鱗癌細(xì)胞系，常用于肺癌的基礎(chǔ)研究和臨床研究。
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
   10245   乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸瓊脂LMG    250g/瓶   用于大腸菌群濾膜法檢測(cè)
   10243   胰蛋白胨膽汁瓊脂（TBA）   250g/瓶   用于大腸桿菌濾膜法檢測(cè)
   10228   乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基   250g/瓶   用于大腸菌群的測(cè)定
   10216   乳糖蛋白胨培養(yǎng)液乳糖   250g/瓶   用于大腸菌群發(fā)酵測(cè)定
   10222   亮綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液BGLB   250g/瓶   用于大腸菌群測(cè)定
   10215   VRB-MUG 瓊脂VRB-MUG    100g/瓶   用于大腸桿菌平板計(jì)數(shù)
   10208   Honda 氏產(chǎn)毒肉湯基礎(chǔ)   250g/瓶   用于致瀉大腸埃希氏菌的產(chǎn) 毒培養(yǎng)，每 100ml 添加* 9mg
   10209   Elek 氏培養(yǎng)基   250g/瓶   用于致瀉大腸埃希氏菌的毒素測(cè) 定
   10256   Tergitol-7 瓊脂   250g/瓶   用于大腸菌群的鑒定（NMKL），每 500ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 20101
   10258   LES-Endo 瓊脂   250g/瓶   用于大腸菌群濾膜法檢測(cè)
   10259   現(xiàn)隱肉湯PA    250g/瓶   用于水中大腸菌群計(jì)數(shù)
   10260   EEM 培養(yǎng)基   250g/瓶   用于腸道致病菌的增菌（日本）
   10262   無鹽麥康凱瓊脂   250g/瓶   用于尿液中變形桿菌和大腸埃希氏菌的分離
   10273   麥康凱瓊脂（不含結(jié)晶紫）   250g/瓶   用于腸道菌的分離和培養(yǎng)
   10403   麥康凱瓊脂（含結(jié)晶紫）   250g/瓶   用于腸道致病菌的選擇性分離
   10409   麥康凱肉湯   250g/瓶   用于腸道菌的選擇性培養(yǎng)
   10220   EC-MUG 培養(yǎng)基   2000ml/瓶   用于大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)   ACNB2   L-型電壓依賴型鈣通道β抗體
Catalase   過氧化氫酶抗體
CYP2C19   細(xì)胞色素P450 2C19抗體
Troponin T   心肌特異肌鈣蛋白T抗體
CD161    CD161抗體
C7orf65   7號(hào)染色體開放閱讀框65抗體
CYT 19   甲基轉(zhuǎn)移酶cyt-19抗體
CCL13   單核細(xì)胞趨化蛋白4抗體
CD34   CD34抗體
CD45   白細(xì)胞共同抗原抗體
phospho-CREM (Ser271 +Ser 274)   磷酸化*反應(yīng)元件調(diào)節(jié)蛋白抗體
Connexin-37   間隙連接蛋白37抗體
CD21   2型補(bǔ)體受體抗體
CD75   唾液酸轉(zhuǎn)移酶1/α-2,6唾液酸轉(zhuǎn)移酶抗體
Carbonate dehydratase IX   碳酸酐酶9抗體