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上海撫生實業有限公司
人喉表皮樣癌細胞;HEp-2-NS1使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人喉表皮樣癌細胞;HEp-2-NS1使用說明書
形態特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
產品名稱 | 人喉表皮樣癌細胞;HEp-2-NS1使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
皰肉牛肉粒 100 加入皰肉基礎中,配成皰肉培養基
卵黃瓊脂培養基基礎 250 用于肉毒梭菌、產氣莢膜梭菌的分離培養(GB標準)
含鐵牛奶培養基 250 用于產氣莢膜梭菌的牛奶發酵試驗
產氣莢膜梭菌 肉毒梭菌 厭氧菌
強化梭菌鑒別瓊脂(DRCA) 250 用于食品和其它物質中梭菌的計數和培養(MERCK方法)
強化梭菌瓊脂 250 用于梭菌的分離培養(MERCK方法)
強化梭菌培養基(RCM) 250 用于梭菌的分離培養(Merck方法)
TSN 瓊脂 250 用于產氣莢膜梭菌的平板計數(Merck方法)
TBB 培養基 250 用于乳酪產品中梭菌的計數(Merck方法) ARMETL1 腦多巴胺神經營養因子抗體
CADPS2 鈣依賴分泌激活蛋白2/自閉癥的相關蛋白抗體
CCKAR 膽囊收縮素A受體抗體
CBLN3 小腦肽3抗體
CDKL5 周期素依賴激酶樣5抗體
Alpha chimerin α1-chimaerin蛋白抗體
CSN7b 信號轉導蛋白9復合體7b抗體
Calcipressin 1/DSCR 1 鈣調神經磷酸酶調節蛋白1抗體(唐氏綜合征候選區域蛋白1樣蛋白1)
CHCHD1 卷曲螺旋結構域蛋白CHCHD1抗體
CHD3 ATP依賴的解旋酶CHD3抗體
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