【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱(chēng) 人胰腺癌細(xì)胞；MIA PaCa-2培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞表達(dá)人集落刺激因子CFS-I和血漿酶原激活劑
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 PN5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR AMEL:X,X；CSF1PO:10,10；D12S391:19,19；D13S317:12,13；D16S539:10,13；D18S51:12,12；D19S433:15,15；D21S11:29,31.2；D2S1338:25,25；D2S441:14,14；D3S1358:16,16；D5S818:12,13；D6S1043:12,12；D7S820:12,13；D8S1179:16,16；FGA:22,22；Penta D:12,16；Penta E:13,18；TH01:9,10；TPOX:9
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
養(yǎng)復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
SS 瓊脂 250 選擇性培養(yǎng)基，用于沙門(mén)氏菌，志賀氏菌的選擇性分離
假單胞分離肉湯 250 用于假單胞菌群增菌培養(yǎng)
肌醇測(cè)定培養(yǎng)基 250 用于嬰幼兒配方食品和乳粉中肌醇測(cè)定
溴甲酚紫葡萄糖肉湯 250 用于低酸性罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
酸性肉湯 250 用于酸性缺罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
*測(cè)定培養(yǎng)基 250 用于嬰兒食品和乳粉中*和*測(cè)定
*測(cè)定培養(yǎng)基 250 用于嬰兒食品和乳粉中*測(cè)定
泛酸測(cè)定培養(yǎng)基 250 用于嬰兒食品和乳粉中泛酸測(cè)定
游離*測(cè)定培養(yǎng)基 250 用于嬰兒食品和乳粉中游離*測(cè)定
氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250 用于氣單胞菌分離培養(yǎng)
醋酸鹽鑒別瓊脂 250
氣單胞菌培養(yǎng)基添加劑 10支 每支添加劑加入100ml氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)
支原體培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250 用于培養(yǎng)支原體的基礎(chǔ)培養(yǎng)基
胰蛋白胨大豆瓊脂 250 一種通用培養(yǎng)基，用于各種微生物的培養(yǎng)(AOAC EP IDF NMKL USDA USP) 5orf34 5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框34抗體
CANX 鈣連蛋白抗體
CRMP2 二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白2抗體
CYP2E1 細(xì)胞色素P450ⅡE1抗體
CX3CR1 趨化因子受體1抗體
phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體
phospho C-Myc(Thr58/pSer62) 磷酸化致癌基因C-Myc抗體
CD33 CD33抗體
phospho-c-kit(Tyr936) 磷酸化原癌基因c-kit抗體
pCCL20/MIP3 alpha 巨噬細(xì)胞炎蛋白MIP-3a抗體
Connexin-32 間隙連接蛋白32抗體
CTBP1 C端結(jié)合蛋白1抗體
CK1+5+10+14 高分子量角蛋白抗體
會(huì)員1.png)
