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人骨肉瘤細胞;HOS使用說明書

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-23 13:40:10瀏覽次數:393次

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產品簡介

人骨肉瘤細胞;HOS使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱 人骨肉瘤細胞;HOS使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  人骨肉瘤細胞;HOS使用說明書
形態特性   上皮細胞樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   細胞表現出高的飽和密度,在軟瓊脂上高電鍍效率在裸鼠體內致瘤性。 
培養條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  PN5
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR   AMEL:X,X;CSF1PO:12,12;D12S391:20,20;D13S317:12,12;D16S539:10,13;D18S51:14,14;D19S433:13,13;D21S11:31.2,31.2;D2S1338:24,25;D2S441:10,10;D3S1358:15,15;D5S818:13,13;D6S1043:18,18;D7S820:11,12;D8S1179:11,14;FGA:24,24;Penta D:9,10;Penta E:7,12;TH01:6,6;TPOX:8,
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
1orf150     1號染色體開放閱讀框150抗體
C1orf156     1號染色體開放閱讀框156抗體
C1orf159    1號染色體開放閱讀框159抗體
C1orf162     1號染色體開放閱讀框162抗體
C1orf163    1號染色體開放閱讀框163抗體
C1orf122     1號染色體開放閱讀框122抗體
C1orf123    1號染色體開放閱讀框123抗體
C1orf124    1號染色體開放閱讀框124抗體
C2orf3     2號染色體開放閱讀框3抗體
C1orf127    1號染色體開放閱讀框127抗體
C改良MSRV培養基配套試劑     SR0530     10支/盒     添加至改良MSRV培養基瓊脂基礎(023025)中制成改良MSRV培養基瓊脂    
改良MSRV培養基瓊脂基礎    23025     250g     用于分離游動性沙門氏菌 (Merck方法)    
志賀氏菌增菌肉湯配套試劑     SR0380     10支     每支添加于225mL的志賀氏菌增菌肉湯(023141)中。    
四硫磺酸鈉亮綠增菌液     SR0050     2X5支     含碘液2ml/支和煌綠1ml/支,2支添加于100mL(023031)中配成TTB    
四硫磺酸鈉煌綠增菌液     SR0040     2X5支     含碘液2ml/支和煌綠1ml/支,2支添加于100mL(023030)中配成TTB    
麥康凱瓊脂    22140     250g     供分離發酵乳糖的革蘭氏陰性腸道桿菌(GB/T4789.28-2003 中4.24和 GB/T4789.5-2003 )。    
XLD瓊脂培養基    29999     250g     用于臨床標本及食品中志賀氏、沙門氏菌選擇性分離。(GB4789.4-2008,FDA BAM chapter5,ISO 657...    
亞利桑那菌瓊脂(SA)    23170     100g     用于亞利桑那菌選擇性分離培養。(SN 0170-92)    
志賀氏增菌肉湯    23141     250g     用于志賀氏菌的選擇性增菌培養。(GB4789.5-2010)    
GN增菌液    23140     250g     用于革蘭氏陰性菌的選擇性培養,特別是志賀氏菌和沙門氏菌的增菌培養(GB/T4789.28-2003 中4.17,...    

 


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