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人源性腎透明細胞癌細胞舒尼替尼耐藥株;ACSuR使用說明書

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-23 13:51:36瀏覽次數:266次

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產品簡介

人源性腎透明細胞癌細胞舒尼替尼耐藥株;ACSuR使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱人源性腎透明細胞癌細胞舒尼替尼耐藥株;ACSuR使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  人源性腎透明細胞癌細胞舒尼替尼耐藥株;ACSuR使用說明書
形態特性   上皮樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。 
培養條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況  C5
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  未定

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
CHIT1    幾丁質酶1抗體
CD97 antigen subunit alpha    白細胞抗原CD97 alpha 抗體
Claudin 2    緊密連接蛋白2抗體
Claudin 7    緊密連接蛋白7抗體
C2orf53     2號染色體開放閱讀框53抗體
C2orf54    2號染色體開放閱讀框54抗體
C2orf56    2號染色體開放閱讀框56抗體
C2orf61    2號染色體開放閱讀框61抗體
CA153    癌相關抗原抗體
CDCA4    細胞分裂周期相關蛋白4抗體
Cytochrome b5    細胞色素b5抗體
CNR2    鈣粘蛋白相關的神經受體2抗體
C1orf186    1號染色體開放閱讀框186抗體
CXCL16    CXC趨化因子16抗體2×YT瓊脂    2×YT Medium Agar    250克    BR
細菌篩選培養基    Bacterium Screening Medium    100克    BR
香蕉粉    Banana powder    100克    BR
ER培養基    Eriksson Medium    10升    BR
ER培養基(含維生素)    Eriksson Medium with vitamins    10升    BR
MS培養基    MS Medium    250克    用于植物組織培養的基礎培養基
MS培養基(含維生素)    MS Medium with vitamins    10升    BR
Nitsch培養基(含維生素)    Nitsch Medium with vitamins    10升    BR
NLN培養基    NLN Medium    250克    用于植物組織培養
NLN培養基(含維生素)    NLN Medium with vitamins    10升    BR
Orchimax培養基    Orchimax Medium    10升    BR
Orchimax培養基(含木炭)    Orchimax Medium with charcoal    10升    BR

 

 


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