小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH3培養(yǎng)

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更新時間：2017-01-24 09:20:28瀏覽次數(shù)：153次

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產(chǎn)品簡介

小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH3培養(yǎng)細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH3培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性懸浮生長
特征特性   SH3該細胞是用人間充質(zhì)干細胞免疫小鼠后取脾細胞與Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞融合而成的雜交瘤細胞；產(chǎn)生抗人間充質(zhì)干細胞的單克隆抗體；IgG2b型；與骨髓來源的間充質(zhì)干細胞及部分間質(zhì)來源組織起反應。該細胞在異十八烷處理的BALB/c小鼠中可形成腹水。
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%FBS
傳代方法   維持細胞濃度在0.2~1×106 cells/ml之間；2~3天換液1次。
傳代情況
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法（-）
STR   -
同工酶
染色體
使用權限 A類

產(chǎn)品名稱	小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH3培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
CDCA8   細胞分裂周期蛋白8抗體
C20orf96    20號染色體開放閱讀框96抗體
C3orf26   3號染色體開放閱讀框26抗體
CADM2   細胞粘附分子2抗體
Cyclin T2   周期素T2抗體
Cyclin K   周期素K抗體
Cathelicidin   抗菌肽CAMP抗體
C5ORF4   5號染色體開放閱讀框4抗體
C4orf44   4號染色體開放閱讀框44抗體CL-0146   LTEP-a-2(人肺腺癌細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0174   NRK-52E(大鼠腎小管導管上皮細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0175   OK(負鼠腎小管細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0176   OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0177   OS-RC-2(人腎癌細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0178   OVCAR-3(人卵巢癌細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0179   P19(小鼠畸胎瘤細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0180   P388D1(小鼠淋巴樣瘤細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0196   RKO(人結(jié)腸腺癌細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0197   RL95-2(人子宮內(nèi)膜癌細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0198   RM-1(小鼠前列腺癌細胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0199   RSC96(大鼠雪旺細胞)   5×106cells/瓶×2