倉鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞；145-2C11使用說明書

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犬源細(xì)胞

貓?jiān)醇?xì)胞

豚鼠源細(xì)胞

倉鼠源細(xì)胞

大鼠源細(xì)胞

小鼠源細(xì)胞

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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

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倉鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞；145-2C11使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 倉鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞；145-2C11使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性懸浮生長(zhǎng)
特征特性   雜交瘤細(xì)胞，用BM10-37小鼠CTL細(xì)胞克隆（抗H-2 Kb）免疫美國(guó)倉鼠，取脾細(xì)胞與Sp2/0-Ag14 骨髓瘤細(xì)胞融合得到；抗小鼠CD3，IgG型。
培養(yǎng)條件   IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium  10%FBS；4mM L-glutamine
傳代方法   維持細(xì)胞濃度在0.1~1×106 cells/ml；2~3天換液1次。
傳代情況
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR   -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	倉鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞；145-2C11使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Cyclooxygenase 3   前列腺素過氧化物合成酶3抗體
CFHL1   補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白1抗體
CPN2   羧肽酶CPN2抗體
CAMK2D   鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2D(CaMKIIδ)
NT5C2   胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ抗體
CIDEB   促進(jìn)凋亡基因抗體
C-jun   原癌基因蛋白/活化蛋白1抗體
CIDEC   細(xì)胞死亡活化蛋白抗體
Cytokeratin 19   細(xì)胞角蛋白19抗體
CK2   細(xì)胞角蛋白2抗體
CK4   細(xì)胞角蛋白4抗體
Cytochrome b245 Light Chain   細(xì)胞色素b245輕鏈抗體
C5ORF44   5號(hào)染色體開放閱讀框44抗體CL-0256   AM(人腺樣囊性癌細(xì)胞（高轉(zhuǎn)移）)   5×106cells/瓶×2
CL-0257   BC-009(人癌細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0258   BC-019(人癌細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0259   BC-020(人癌細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0260   BC-021(人癌細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0261   BC-022(人癌細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0262   BE(2)-M17(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0263   BGC-803(人胃癌細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0264   C918(人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0265   CAL-27(人舌鱗癌細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0266   LS 180(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0283   Ishikawa(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0285   L-O2(人正常肝細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2
CL-0286   M1(小鼠白血病細(xì)胞)   5×106cells/瓶×2

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