【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 小鼠黑色素瘤細胞；B16培養
形態特性 梭形
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞源于C57BL/6J小鼠黑色素瘤，可以產生黑色素，同基因小鼠體內移植可成瘤。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:4~1:10傳代；2~3天換液1次。
傳代情況 P21
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法（-）
STR -
同工酶
染色體 63~67
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Corin 心臟特異*蛋白酶抗體
CPLA2 胞漿型磷脂酶A2抗體
CCAR1 細胞周期及凋亡調節蛋白1抗體
CD56 神經細胞粘附分子1抗體
Claudin 5 緊密連接蛋白5抗體
CRIM1 富含半*運動神經元蛋白1抗體
CK5+6 細胞角蛋白5+6抗體
MUC1 癌相關抗原抗體
Caspase-6 (NT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)
CDK3 周期素依賴激酶3抗體
Calcineurin A 鈣調磷酸酶抗體
Calpain 1 鈣蛋白酶1抗體
Calponin 1 鈣調節蛋白-1抗體
Caspase-6 (CT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體（C端）
Cyclin A2 周期素A2抗體CL-0294 MuM-2C(人眼脈絡黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0295 MV3(人黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0296 MX-1(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0279 WTRL1(大鼠肺細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0297 Y3-Ag 1.2.3(大鼠骨髓瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0311 293E(人胚腎細胞（EBNA1基因修飾）) 5×106cells/瓶×2
CL-0312 293ET(人胚腎細胞（SV40T和EBNA1基因修飾細胞）) 5×106cells/瓶×2
CL-0313 293FT(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0314 2V6.11(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0315 A3(人T淋巴細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0316 A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0317 AML-193(人急性單核細胞白血病單核細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0318 B16-F1(小鼠黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0319 B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
