【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞（B類）；Pan02-CAG-tTA-3E6使用說明書
形態特性 多角
生長特性 貼壁生長
特征特性 轉染pCAG-tTA質粒，經2.0ug/ml puromycin篩選，為Tet-off穩定調控細胞系，受*Dox調控倍數在20~50倍。細胞倍增時間為24小時。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 5%FBS + 2.0ug/ml puromycin
傳代方法 1:4傳代，2~3天傳代一次。
傳代情況
凍存條件 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權限 B類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Ephrin A1 Receptor 肝配蛋白A1受體抗體
EDC4 自身抗原EDC4抗體
UBR5 E3泛素蛋白連接酶EDD抗體
EED 胚胎外胚層發育蛋白EED抗體
KAT3B/Ep300 轉錄接頭蛋白EP300抗體
Endothelial lipase 內皮脂肪酶抗體
ENO1 MYC啟動子結合蛋白1抗體
ERp29 內質網蛋白29抗體
ECHS1 烯脂酰*水解酶抗體
phospho-eIF4EBP1 (Ser64) 磷酸化4E結合蛋白1抗體
EHHADH 三羥酰*脫氫酶抗體
EML4 限制過度增殖相關蛋白EML4抗體/E中和肉湯 250g 用于衛生環境中微生物培養
D/E Ｎeutralizing Broth
D/E中和瓊脂 250g 用于衛生環境中微生物的分離培養
D/E Ｎeutralizing Agar
M-肉湯 250g 用于干燥食品和種子中沙門氏菌增菌培養
M-Broth
煌綠黃胺嘧啶瓊脂 250g 用于沙門氏的分離培養
Brilliant Green Agar w/Sulfadiazine
沙門氏志賀氏增菌液 250g 用于志賀氏菌和沙門氏菌增菌培養
Salmonella Shigiella Enrichment
0.1%煌綠 1ml*20 每支添加于100mlHB4086中
0.1%brilliant green
Kovcas氏靛基質試劑盒 5ml*2 吲哚（靛基質）試驗配套試劑
新生霉素 1.5mg/支*5 每支加入100mlHB4153中
志賀氏菌增菌肉湯 250g 用于志賀氏菌的選擇性增菌培養
