【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 小鼠肝癌細胞；H22培養
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞系分離自小鼠腹水，由大連醫*建立。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C15
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
KIF3A 驅動蛋白家族蛋白3抗體
KLC1 驅動蛋白2抗體
KIAA1522 KIAA1522蛋白抗體
KCTD5 鉀離子通道四聚體結構域蛋白5抗體
KLMW Kininogen 高分子量激肽原重鏈抗體
KCTD11 鉀通道四聚體結構域蛋白11抗體
KLHL26 Kelch樣蛋白26抗體
KDEL (ER Marker) 賴氨酸，天冬氨酸，*，*相關序列抗體
KLHL10 Kelch樣蛋白10抗體
KLHL11 Kelch樣蛋白11抗體
KLHL3 Kelch樣蛋白3抗體
KLHL14 Kelch樣蛋白14抗體
KLHL31 Kelch樣蛋白31抗體
KLHL32 Kelch樣蛋白32抗體
KCNA5 鉀電壓閥門通道混合器相關亞家族成員5抗體苦玄參苷IB
白術內酯I;蒼術內酯I Atractylenolide-1 73069-13-3 230.3 C15H18O2
安格洛苷C;安格洛甙C Angoroside C 115909-22-3 784.75 C36H48O19
白術內酯II;蒼術內酯II 2-Atractylenolide 73069-14-4 232.32 C15H20O2
蒼術素 Atractylodin 55290-63-6 182.22 C13H10O
木蘭花堿 Magnoflorine 2191-49-5
澳洲茄胺;澳州茄胺 solasodine 126-17-0 413.64 C27H43NO2
麥角甾醇;麥角固醇 Ergosterol 57-87-4 396.65 C28H44O
靈芝酸D Ganoderic acid D 108340-60-9 514.65028 C30H42O7
靈芝酸A GANODERIC ACID A 81907-62-2 514.65028 C30H42O7
靈芝烯酸D Ganoderenic acid D 100665-43-8 512.6344 C30H40O7
靈芝酸G Ganoderic acid G 98665-22-6 532.66556 C30H44O8
靈芝酸F Ganoderic acid E 98665-14-6 512.6344 C30H40O7
赤芝酸LM1;赤芝酸N Lucidenic acid LM1;Lucidenic acid N 364622-33-3
