細胞名稱 小鼠黑色素瘤細胞；B16-F1使用說明書
形態特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 B16-F1是B16-F0的亞系。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C27
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
KLF10 TGF-β誘導早期應答基因1抗體
KCNA3 離子通道蛋白Kv1.3抗體
phospho-KLF5(Ser272) 磷酸化KLF5抗體
KLK6 *6抗體
KLK8 *8抗體
KLKB1 血漿*抗體
phospho-EZH2 (Thr487) 磷酸化抑癌蛋白EZH2抗體
KDM5B 組蛋白去甲基化酶JARID1B抗體
Keratan Sulfate 硫酸角質素抗體
KRG2 角質細胞生長因子調節蛋白2抗體
KCNG4 鉀離子通道蛋白G蛋白4抗體
KCTD18 鉀通道多聚體結構域KCTD18抗體
KEAP1 胞質接頭蛋白Keap11紫草酸 Lithospermic acid 28831-65-4 538.46 C27H22O12
赤芝酸C Lucidenic acid C 95311-96-9
赤芝酸E Lucidenic acid E 98665-17-9
赤芝酸L
赤芝酸B Lucidenic acid B 95311-95-8
赤芝酸A Chol-8-en-24-oic acid,7-hydroxy-4,4,14-trimethyl-3,11,15-trioxo-, (5a,7b)- 95311-94-7 C27H38O6
靈芝烯酸E Lanosta-8,20(22)-dien-26-oicacid, 7,12-dihydroxy-3,11,15,23-tetraoxo-, (7b,12b,20E)- (9CI) 110241-23-1 C30H40O8
林澤蘭內酯D
雞屎藤苷 Paederoside 20547-45-9 446.43 C18H22O11S
雞屎藤苷甲酯 Paederosidic acid methyl ester 122413-01-8
雞屎藤苷酸 Cyclopenta[c]pyran-4-carboxylicacid, 1-(b-D-glucopyranosyloxy)-1,4a,5,7a-tetrahydro-5-hydroxy-7-[[[(methylthio)carbonyl]oxy]methyl]-,(1S,4aS,5S,7aS)- 18842-98-3 C18H24O12S
木通苯乙醇苷B;荷苞花苷B Calceorioside B 105471-98-5 478.44594 C23H26O11
鬧羊花毒素II Grayanotoxane-5,6,10,14,16-pentol,2,3-epoxy-, 6-acetate, (2b,3b,6b,14R)- (9CI) 26116-89-2 410.50116 C22H34O7
鬧羊花毒素III Grayanotoxane-5,6,10,14,16-pentol,2,3-epoxy-, (2b,3b,6b,14R)- 26342-66-5 368.46448 C20H32O6
鬧羊花毒素V (2β,3β,14R)-2,3-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pentol 14-acetate 37720-86-8 410.50116 C22H34O7
蟾毒靈;蟾酥靈 Bufalin 465-21-4 386.52 C24H34O4
