小鼠雜交瘤細(xì)胞；D47-u使用說明書

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更新時(shí)間：2017-02-04 10:54:13瀏覽次數(shù)：132次

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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

小鼠雜交瘤細(xì)胞；D47-u使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	小鼠雜交瘤細(xì)胞；D47-u使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞；D47-u使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性   該雜交瘤細(xì)胞由湖南遠(yuǎn)泰生物技術(shù)有限公司制備并提交，細(xì)胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
phospho-Kv2.1(Tyr128)   磷酸化鉀通道蛋白DRK1抗體
KCNC4   離子通道蛋白Kv3.4抗體
KCNC3/Kv3.3   離子通道蛋白Kv3.3抗體
KDM4B   組蛋白去甲基化酶JMJD2B抗體
Ketohexokinase   肝果糖激酶抗體
KY   脊柱側(cè)后凸畸形肽酶抗體
KAT2B   組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶PCAF抗體
Phospho-c-Kit(Ser741)   磷酸化原癌基因c-kit抗體
Phospho-c-Kit(Ser721)   磷酸化原癌基因c-kit抗體
KCNC1   離子通道蛋白Kv3.1抗體
KLK11   *11抗體
Kappa Light Chain   k輕鏈抗體重樓皂苷VI   Polyphyllin VI   55916-51-3   736.92896   C40H64O12
重樓皂苷VII   Pennogenin tetraglycoside   68124-04-9   1031.18418   C51H82O21
*;重樓皂苷III   Dioscin   19057-60-4   869.05   C45H72O16
*元   Diosgenin   512-04-9   414.63   C27H42O3
原*   Protodioscin   55056-80-9   1049.19946   C51H84O22
偽原*   Pseudoprotodioscin   102115-79-7   1031.18   C51H82O21
纖細(xì)*   gracillin   19083-00-2   248.32   C15H20O3
花椒毒酚;花椒毒醇   7H-Furo[3,2-g][1]benzopyran-7-one,9-hydroxy-   2009-24-7   202.16294   C11H6O4
佛手柑內(nèi)酯;香柑內(nèi)酯;5-甲氧基補(bǔ)骨脂素   Bergapten   484-20-8   216.19   C12H8O4
山柰酚;酚   kaempferol   520-18-3   286.24   C15H10O6
連翹酯苷B   Forsythoside B   81525-13-5   756.70176   C34H44O19
雙去氧基姜黃素   BIS(4-HYDROXYCINNAMOYL)METHANE   24939-16-0   308.33   C19H16O4C19H16O4

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