【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞；APP使用說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 半貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該雜交瘤細(xì)胞由湖南遠(yuǎn)泰生物技術(shù)有限公司制備并提交，細(xì)胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C10
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
香葉木素-7-O-β-D-葡萄糖苷 3',5-Dihydroxy-7-(β-D-glucopyranosyloxy)-4'-methoxyflavone 20126-59-4 462.40348 C22H22O11
草質(zhì)素;蜀葵苷元;蜀葵甙元;3,4',5,7,8-五羥基黃酮 4H-1-Benzopyran-4-one,3,5,7,8-tetrahydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)- 527-95-7 302.2357 C15H10O7
格列風(fēng)內(nèi)酯 2(6H)-Benzofuranone,7,7a-dihydro-6,7-dihydroxy-, (6R,7S,7aS)- 61371-55-9 C8H8O4
百蕊草素I;山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷;阿福豆苷 Kaempferol 3-glucorhamnoside 40437-72-7 594.52 C27H30O15
石吊蘭甲素 Lysionotin 152743-19-6 344.31544 C18H16O7
紫菀酮 Shionone 10376-48-4 426.7174 C30H50O
次野鳶尾黃素 Irisflorentin 41743-73-1 386.35212 C20H18O8
鴨腳樹(shù)葉堿 Picrinine 4684-32-6 338.40028 C20H22N2O3
表木栓醇 Epifriedelanol 16844-71-6 428.73 C30H52O
異佛司可林 1H-Naphtho[2,1-b]pyran-1-one,6-(acetyloxy)-3-ethenyldodecahydro-5,10,10b-trihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-,(3R,4aR,5S,6S,6aS,10S,10aR,10bS)- 64657-21-2 410.50116 C22H34O7LRSAM1 LRSAM1蛋白抗體
Limd1 LIM結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體
Lactic acid bacterial protein surface 乳酸菌菌體表面蛋白抗體
Layilin 透明質(zhì)酸受體抗體
LTA4H 白三烯A4水解酶抗體
LXR alpha 肝臟X受體抗體
LAPTM4B 溶酶體蛋白跨膜β4抗體
LRRN5 富含*重復(fù)神經(jīng)元5抗體
Lipophilin B 親脂蛋白B抗體
LDOC1 癌癥*拉鏈下調(diào)因子1抗體
LOXL2 賴氨酰氧化酶相關(guān)蛋白2抗體
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