小鼠雜交瘤細(xì)胞；Akt2使用說明書

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更新時(shí)間：2017-02-04 11:32:47瀏覽次數(shù)：190次

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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

小鼠雜交瘤細(xì)胞；Akt2使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱	小鼠雜交瘤細(xì)胞；Akt2使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞；Akt2使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性   該雜交瘤細(xì)胞由湖南遠(yuǎn)泰生物技術(shù)有限公司制備并提交，細(xì)胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C10
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
人參二醇   Panaxadiol   19666-76-3   460.73208   C30H52O3
人參三醇   Panaxatriol   32791-84-7   476.73148   C30H52O4
柴胡皂苷D   Saikosaponin D   20874-52-6   780.98   C42H68O13
8-姜酚   8-GINGEROL   23513-08-8   322.44   C19H30O4
6-姜烯酚   6-Shogaol   555-66-8   276.37   C17H24O3
隱丹參酮   Cryptotanshinone   35825-57-1   296.36   C19H20O3
丹參素鈉   Sodium danshensu   67920-52-9   220.16   C9H9NaO5
染料木素   Genistein   446-72-0   270.24   C15H10O5
染料木苷   Genistin   529-59-9   432.38   C21H20O10
大豆苷   Daidzin   552-66-9   416.38   C21H20O9
豆甾醇   Stigmasterol   83-48-7   412.7   C29H48O
川楝素   Toosendanin   58812-37-6   574.62   C30H38O11
綠原酸   Chlorogenic acid   327-97-9   354.31   C16H18O9
遠(yuǎn)志酸   Polygalacic acid   22338-71-2   504.7   C30H48O6Phospho-mTOR (Tyr144)   磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體
MeCP2   甲基化CpG結(jié)合蛋白2抗體
Phospho-mTOR (Thr2446)    磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體
MT-ND6   NADH復(fù)合體6抗體
MAGEA11   黑色素瘤相關(guān)抗原11抗體
Msx2   同源盒基因Msx2抗體
phospho-MARK4(Ser423)   磷酸化*/*蛋白激酶MARK4抗體
MTCBP1   膜型基質(zhì)金屬蛋白酶胞質(zhì)尾結(jié)合蛋白1抗體
p95 NBS1   細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白P95抗體
MAP LC3 Beta   自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈β3抗體