【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞；CANX培養
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 半貼壁生長
特征特性 該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交，細胞注射小鼠腹腔可產生高滴度的單抗，可用于基礎研究和臨床檢驗。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C10
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
MIG6 有絲分裂原誘導基因6抗體
Mitofusin 2 線粒體融合蛋白Mfn2抗體
Mammaglobin A 珠蛋白1抗體
MYL9 肌球蛋白輕鏈9抗體
phospho-MYL9(Thr19) 磷酸化肌球蛋白輕鏈9抗體
MT-ND1 NADH復合體1抗體
MUC1 癌相關抗原抗體
MYST1 組蛋白乙酰轉移酶MOF抗體
Mesothelioma 間質細胞蛋白抗體
MYL3 肌球蛋白輕鏈3抗體* puerarin 3681-99-0 416.38 C21H20O9
青藤堿 Sinomenine 115-53-7 329.39 C19H23NO4
蝙蝠葛堿 DAURICINE 524-17-4 624.77 C38H44N2O6
楊梅苷 3-[(6-deoxy-α-L-mannopyranosyl)oxy]-5,7-dihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-4H-benzopyran-4-one 17912-87-7 464.3763 C21H20O12
二氫楊梅素 Dihydromyricetin 27200-12-0 320.25 C15H12O8
楊梅素 Myricetin 529-44-2 318.24 C15H10O8
白藜蘆醇 resveratrol 501-36-0 228.24 C14H12O3
*內酯 Andrographolide 5508-58-7 350.45 C20H30O5
脫水*內酯 Dehydroandrographolide 134418-28-3 332.43 C20H28O4
原兒茶醛 3,4-Dihydroxybenzaldehyde 139-85-5 138.12 C7H6O3
原兒茶酸 3,4-Dihydroxybenzoic acid 99-50-3 154.12 C7H6O4
丹皮酚 2'-Hydroxy-4'-methoxyacetophenone 552-41-0 166.18 C9H10O3
